杂交瘤技术的原理及其操作演示.PPT

杂交瘤技术制备单克隆抗体的实验原理 接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗体，在体液免疫中具有重要功能。 B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡——短命细胞 一、杂交瘤技术产生的3个技术关键 1. B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的特性： B淋巴细胞(B lymphocytes)： 骨髓瘤细胞 (myeloma cells): 恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适合可永远分裂和存活——长命细胞。 经筛选与驯化，现已建立多种骨髓瘤细胞株——没有抗体分泌物。 2. 细胞融合技术： 脾细胞 (B淋巴细胞) 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 长命 不分泌抗体 分泌抗体 短命 分泌抗体 长命 K?hler和Milstein, 1975 1984年Nobel医学奖 3. 杂交瘤细胞的筛选 ： 脾细胞 (B淋巴细胞) 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 脾细胞/?脾细胞 骨髓瘤细胞/ ?骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞 脾细胞 筛选出 不能长期存活 不能长期存活 HAT培养基筛选 H, 次黄嘌呤; A, 氨基喋呤; T, 胸腺嘧啶 DNA 内源性途径(主要途径) 谷氨酰胺 or 单磷酸尿苷酸 二氢叶酸还原酶 A H T 外源性途径(旁路途径) (Hypoxanthine guznine phosphoribosyl transferase) 次嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 ( HGPRT )