市售正清风痛宁肠溶片在Beagle犬体内相对生物等效性.docVIP

市售正清风痛宁肠溶片在Beagle犬体内相对生物等效性 　　摘要：目的探讨正清风痛宁肠溶片在Beagle犬体内的相对生物等效性。方法选用10只Beagle犬单剂量随机交叉口服正清风痛宁肠溶片受试制剂或参比制剂10mg?kg-1,用高效液相色谱法测定血药浓度，3p97软件计算药动学参数和并行相对生物等效性评价。结果受试制剂与参比制剂的药-时曲线呈一室模型，主要药动学参数Tmax分别为（86.25±10.61）min和（75.00±16.04）min，Cmax分别为（0.18±0.038）ug?ml-1和（0.18±0.042）ug?ml-1，AUC 0～T分别为（30.31±7.82）ug?min?ml-1和（32.09±8.61）ug?min?ml-1，受试制剂相对生物等效性为（94.45±5.49）%。结论经方差分析、单双侧t检验和非参数统计检验，表明受试制剂与参比制剂具有生物等到效性。 　　关键词：正清风痛宁肠溶片；高效液相色谱法、相对生物等效性 　　正清风痛宁肠溶片具有抗炎抗风湿、免疫抑制、镇静、镇痛的作用，已广泛应用于临床[1]。该制剂的主要成份是从传统治疗风湿性疾病中药清风藤提取的一种单体成分青藤碱（sinomenine）。有关青藤碱的药动学已有文献报道[2]，但其市售不同厂家肠溶片在Beagle犬体内的相对生物等效性未见文献报道，现将研究结果报道如下，供临床医生参考。 　　1资料与方法 　　1.1仪器Angilent1100高效液相色谱仪，Phenomenex Gemini C18色谱柱（4.6mm×250mm，5um）；VXH-3型快速混合器（上海跃进医疗器械厂）；PHS-3C酸度计（上海精密科学仪器有限公司）；B160A型医用低速离心机（河北省安新县白洋离心机厂）；BP61型电子天平（德国Sartorius公司）。 　　1.2药品和试剂①受试制剂，西安利君制药有限责任公司生产的正清风痛宁肠溶片（商品名为正清风痛宁片），规格：20mg/片，批号0707291。②参比制剂，湖南正清制药集团股份有限公司生产的的正清风痛宁肠溶片，规格：20mg/片，批号0803103。③青藤碱标准品，外观为白色结晶粉末，无臭，味苦，易溶于水，溶解于乙醇，纯度98%，西安赛邦医药科技有限公司提供，批④内标物，去水吗啡，规格：5mg：1ml，沈阳第一制药厂，批⑤二氯甲烷为色谱纯，其余试剂均为分析纯。 ⑥重蒸水（重庆医科大学附属医院药剂科）。 　　1.3动物合格Beagle犬10只，体重（10±0.8）kg，雌雄各半，四川养麝研究所提供，质量合格证号和环境设施合格证号SCXK(川)2008-01。 　　1.4方法 　　1.4.1给药方案与血样采集选择用10只Beagle犬，雌雄各半，随机分为受试制剂和参比制剂两组，每组5只，分别口服受试制剂或参比制剂，1w后两组动物交叉给药，给药剂量为试验前禁食12h后，按人与动物用量转换[4]，于次日8时空腹灌服受试制剂或参比制剂10.0mg?kg-1,于给药后0,15,30,60,90,120,240, 　　480min,从隐静脉取血2ml，肝素抗凝，分离血浆，低温保存（-20℃）待测。 　　1.4.2血药浓度测定方法 　　1.4.2.1色谱条件 PhenomenexGeminiC18色谱柱（4.6mm×250mm，5um），流动相为甲醇-0.01mol?L-1磷酸二氢钠-三乙胺（55：45：0.1，调pH至7），流速0.8ml?min-1；检测波长262nm；柱温30℃；内标去水吗啡；进样量50ul。 　　1.4.2.2青藤碱标准溶液的配制精密称取青藤碱标准品适量，用甲醇定容，配成300ug?ml-1储备液，于4℃保存。用前，用犬空白血浆按所需倍数稀释法稀释至所需浓度，得青藤碱的标准工作液。 　　1.4.2.3内标液的配制取去水吗啡液（5mg：1ml），用甲醇配为200ug?ml-1的储备液，于4℃保存。临用前，加蒸馏水稀释成40ug?ml-1，得内标工作液。 　　1.4.2.4样品处理取血浆样品0.4ml，加入去水吗啡内标50uL（40ug?ml）混合均匀，再行加入二氯甲烷4ml，漩涡混匀后置3500r?min-1离心机离心5min，等待静置分层，取有机层，置50℃水浴中氮气吹干，用流动相复溶100uL，每次进样50uL。 　　1.5数据处理药动学参数计算是采用3p97计算机软件。所得Cmax、Tmax用实测值表示；AUC0～T 用梯形法计算，口服给药的生物利用度 F=受试制剂（AUC0～T）/参比制剂（AUC0～T）×100% 　　2结果 　　2.1特异性在选定的色谱条件下，青腾碱和内标物质峰形好，与血浆中内源性物质及其他杂质分离良好，见图1，图A，B，C