纯化水需氧菌总数计数方法的验证.docVIP

目 录 一、引言 1、概述 2、验证的目的 二、验证方法合格标准 三、主要材料确认 1、仪器设备确认 2、辅助材料确认 3、人员确认 4、商品培养基及灭菌培养基确认 5、菌种及菌液的制备 四、样品制备 1、稀释液 2、供试液制备 3、操作方法 五、方法验证 1、需氧菌总数的计数方法验证 2、计算菌回收率公式 六、验证结果及评价 七、再验证周期 八、验证结论批准 一、引言 1、概述： 根据《中国药典》2015年版三部 “1105 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法”（以下简称《药典》）的要求，对内控标准中有“微生物限度”检查项的产品进行该项验证。《中国药典》2015年版三部 2、验证目的： 确保药品微生物限度检查实验的准确性，在建立药品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌总数计数方法的验证，以确认所采用的方法适合于该样品的需氧菌总数的测定。 验证方法合格标准 2.计数方法适用性试验：在3次独立的平行试验中，若试验组的菌回收率（试验组的平均菌落数减去供试品对照组的平均菌落数的值与菌液对照组的平均菌落数的比值）均在0.5～2范围内，照该供试液制备方法和计数法测定供试品的需氧菌总数。 三、主要材料确认 1、仪器、设备确认 名 称 型 号 存放地点 厂 家 工作 状态 校验 期至 生化培养箱 (30~35) HPS-400 118室 南京实验仪器厂 立式压力蒸汽 灭菌器 LDZX-100KBS 116室 上海申安医疗 器械厂 生物安全柜 BSC-1100B2 阳性室 北京东联哈尔仪器 制造有限公司 冰箱 HY-S13-03 116室 北京低温设备厂 热空气消毒箱 GX625E 116室 天津市泰斯特仪器 有限公司 检查结果： 检查人： 复核人： 日期： 2、辅助材料确认 2.1移液器、接种环、酒精灯、记号笔、酒精棉球、试管架、试管、玻璃平皿、止血钳等 2.2需灭菌物品见《微生物限度检查法验证记录》 2.3一次性无菌用具见下表 无菌备品的检查 备品名称 批号 有效期 包装情况 薄膜过滤器 无热原吸头 无菌橡胶医用手套 检查结果： 检查人： 复核人： 日期： 3、人员确认 化验员 经设备操作、微生物检验技术和实验室生物安全等方面的培训，考核合格后上岗。 4、商品培养基及灭菌培养基 4.1 所用培养基均不得有结块、吸潮、异味、颜色发生改变等现象。 培养基检查结果，如下 品名 批号 储藏条件 有效期 生产厂家 胰酪大豆胨培养基 阴凉 干燥处 三年 R2A琼脂培养基 阴凉 干燥处 三年 检查结果： 检查人： 复核人： 日期： 4.2已灭菌培养基的检查结果及结论见《微生物限度检查法验证记录》。 5、菌种及菌液的制备 5.1菌种来源：黑龙江省药检所 菌种确认 菌种名称 传代日期 代数 管号 传代人 形态确认 铜绿假单胞菌 年 月 日 枯草芽孢杆菌 年 月 日 取用一周内该车间水系统环境菌 水系统环境菌（冻干二） 取用一周内该车间水系统环境菌 水系统环境菌（固体车间） 取用一周内该车间水系统环境菌 5.2菌液的制备 取铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌的新鲜培养物少许接种至胰酪大豆胨培养基上胰酪大豆胨培养基，30~35培养18~24小时；上述培养物用H7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。菌液制备后在室温下放置，2 小时内使用~8℃可在24h内使用。 5.3菌液菌落数：详见《微生物限度检查法验证记录》 四、样品制备 1稀释液：氯化钠-蛋白胨缓冲液。 2供试液制备：薄膜过滤法 取本品1ml加氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，混匀。 3操作方法：取上述供试液100ml，按薄膜过滤法过滤，滤完后取出滤膜，菌面朝上贴于已的R2A琼脂培养基平板上，平行制备两个平皿。需氧菌总数计数平板倒置于30~35培养箱培养5天。 五、方法验证需氧菌总数的计数方法验证 设置试验组、菌液对照组、供试品对照组，分别取三个不同日期的供试品进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。 （1）试验组 取供试液100ml，含菌数不大于100cfu/ml的试验菌1ml，按薄膜过滤法过滤。过滤完毕后取出滤膜，菌面朝上贴于的R2A琼脂培养基平板上，平行制备两个平皿。 （2）菌液对照组 取供试液100ml，按薄膜过滤法过滤。过滤完毕后取出滤膜，菌面朝上贴于的R2A琼脂培养基平板上，平行制备两个平皿。 （3）供试品对照组 取100ml，含菌数不大于100cf