分子诊断检验PCR课件.pptVIP

乙型肝炎病毒的荧光定量PCR检测 主讲人：赵丽萍 ㈠什么是PCR技术？荧光定量PCR检测乙肝病毒核酸的原理是什么？ PCR又称聚合酶链反应，是通过对基因的选择性片段进行体外高效扩增，实现目的基因的检测。荧光定量PCR检测乙肝病毒核酸的原理是用一对乙型肝炎病毒特异性引物和一条乙型肝炎病毒特异性荧光探针，配以PCR反应液、耐热DNA聚合酶（Tap酶）、核苷酸单体（dNTPs）等成分，用PCR体外扩增法定量检测乙型肝炎病毒DNA。 ㈡HBV-DNA荧光定量检测与“两对半的比较 PCR技术具有敏感性高、特异性强、快速简便等优点，是从分子生物学水平直接检测病毒自身的遗传物质DNA，是病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标，能够快速准确地做出协助诊断。 ㈢荧光定量PCR检测乙肝病毒核酸的临床意义： 1.HBV感染病毒复制水平的判断：血清（浆）HBV DNA含量高，反映病毒复制活跃。在HBeAg（+）者，HBV DNA高水平（≥108 IU/ml或109拷贝/ml）常见于高免疫耐受者，肝细胞病变轻微。HBV DNA低水平（≤104IU/ml或105拷贝/ml）意味着病毒的低复制。HBV DNA109拷贝/ml,则在日常密切接触中有较强传染性，105-106拷贝/ml传染性较小，＞105的患者，如果体内ALT水平异常，应考虑接受抗病毒治疗，105拷贝/ml几乎没有传染危险，但在输血中，只要血液中有3-169个病毒即可发生感染。 * “两对半”是从免疫学水平来检测HBV感染机体后引起免疫应答，产生相应抗原抗体的含量（这个“含量”还不是定量，而只是抗原抗体的“有”或“无”），这些免疫学指标不能反映患者或病人体内病毒的复制水平及传染程度，且免疫学检测存在“窗口期”问题，不能判定是现症感染还是既往感染。 *