化妆品中禁用物质氨基己酸的检验方法-浙江保健品化妆品行业协会.DOC

PAGE 2 -附件8：化妆品中禁用物质氨基己酸的检验方法（征求意见稿）1 适用范围本方法规定了测定液体类、膏霜乳类、固体粉类化妆品中氨基己酸的高效液相色谱法。本方法适用于液体类、膏霜乳类、固体粉类化妆品中氨基己酸的含量测定。本方法中氨基己酸的检出限、定量下限及取0.2g样品时的检出浓度和最低定量浓度见表1。表1 氨基己酸的检出限、定量下限、检出浓度和最低定量浓度检出限（ng）定量下限（ng）检出浓度（?g/g ）最低定量浓度（?g/g）501501254002 方法提要 氨基己酸在210nm处有紫外吸收，可用高效液相色谱分离，并根据保留时间和紫外光谱图定性，峰面积定量。对于阳性结果，可用液相色谱-质谱进行进一步确证。3 试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为一级实验用水。3.1 甲醇，色谱纯。3.2 磷酸，优级纯。3.3 磷酸二氢铵，分析纯。3.4 氯化钠，分析纯。3.5 甲酸，色谱纯。3.6 标准储备溶液（?＝500mg/L）：称取氨基己酸约0.05g（精确到1mg）于小烧杯中，加水适量，超声溶解后转移至100mL容量瓶中，水定容至刻度，摇匀，配成质量浓度为500mg/L的标准溶液。3.7 标准系列：移取氨基己酸标准储备溶液0.20mL、1.00mL、2.00mL、5.00mL、10.00mL于10mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。此时溶液中各组分浓度分别为10mg/L、50mg/L、100 mg/L、250 mg/L和500 mg/L。4 仪器和设备4.1 高效液相色谱仪，具有二极管阵列检测器，配色谱工作站。4.2 液相色谱质谱联用仪。4.3 超声波清洗器。4.4 离心机。4.5 天平，感量0.0001g。4.6 天平，感量0.001g。5 分析步骤5.1 样品预处理称取样品约0.2g（精确至0.001g）于10mL具塞比色管中，加入0.5mL饱和氯化钠溶液，旋涡振摇1min，用流动相稀释至刻度，超声浸提20min（浑浊样品需高速离心）。经0.45?5.2 测定5.2.1 色谱参考条件 色谱柱： C18 柱（250mm×4.6mm，5? 流动相：甲醇＋0.1mol/L磷酸二氢铵溶液（磷酸调节pH至3.0）＝2＋98； 流速：1.0mL/min；检测器：二极管阵列检测器，检测波长为210nm；柱温：25℃进样量：20?5.2.2 校准曲线的制备在设定色谱条件下，取氨基己酸标准系列（3.5）20?5.2.3 样品测定在设定色谱条件下，进20?6 平行实验 按以上步骤，做两份样品的平行测定。在重复性条件下获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两次测定值的算术平均值的10%。7 计算 D ? ? ? Vw（氨基己酸）= ——————×10-4 m式中：w（氨基己酸）——化妆品中氨基己酸的质量分数，%；? —— 从校准曲线上查得的待测样液中氨基己酸的质量浓度，mg/L；V —— 样品定容体积，mL；m —— 样品用量，g；D —— 稀释倍数（不稀释则取1）。8 回收率和精密度经多家实验室验证，氨基己酸的加标回收率在91.3% ～ 113%之间，相对标准偏差在0.18% ～ 3.94%之间。9 色谱图minmin246810mAU-202468101214 6.924图1 氨基己酸标准色谱图10 阳性结果的确证测定过程中如果有阳性结果，可采用液相色谱-质谱法（LC/MS）进行进一步确证。10.1 液相色谱参考条件色谱柱：C18（35 mm×2.0 mm，流动相：甲醇＋0.1%甲酸水溶液=10+90。流速：0.2mL/min。进样体积：20μL。10.2 质谱参考条件离子源：电喷雾离子源（ESI源）。监测模式：正离子监测模式。离子源电压（IS）：4500V。鞘气：35arb、辅助气：5arb。毛细管温度：350℃碰撞能量（CE）值应优化至最佳灵敏度。保留时间：1.03min。定性离子对：132.2/114.2 m/z。RT:RT:0.00 - 15.0002468101214Time (min)051015202530354045505560657075808590951001.01std100图2 氨基己酸液相色谱-质谱联用色谱图 5060708090100110120130140150m/z05101520253035404550556065707580859095100132.16114.14133.40115.2097.0969.2696.05116.9099.1779.3453.87124.26136.37