目基因转移11.28.pptVIP

基因工程方案 ： 分 、切 、接 、转 、筛 一 、分：目的基因的分离：从染色体 DNA 中分离 ；人工合成 ；反转录 ；基因文库 二、切：限制性内切酶的应用：平端切口；粘端切口 三 、接：把载体和目的基因连接成重组体：DNA 连接酶；“ 尾接法”；“ 人工连接器” 四 、转：重组体的转化 五 、筛：DNA 重组体筛选与鉴定：表型 ，DNA 限制酶酶切图谱, 核酸杂交 , 表达产物鉴定等 。 目的基因的转移——重组体的构成、导入和筛选 载体：概念；筛选标志和方法；多克隆位点；用途 连接方法：平末端；粘性末端；定向克隆、T-A克隆 导入：转化、转染、转导、感受态菌 鉴定 接入的工具——载体 载 体 载体：携带靶DNA片段进入宿主细胞进行扩增和/或表达的工具。 载体类型：质粒；噬菌体；病毒。大多经过人工改造 载体特征 在细胞内能自主复制，即必须具备复制原点（必需） 具备适合的酶切位点（必需） 通常有筛选标记，如对抗菌素的抗性，某些基因产物的显色反应等 拷贝数高 质粒载体 质粒：细菌染色体外小型双链环状DNA，对细菌的某些代谢活动和抗药性的表型均有一定的作用。 质粒复制的类型 严紧型：1-5拷贝，与细菌复制密切相关 松弛型：10-200拷贝以上 常用载体： pBR322：4.36kb；人工构建；Tetr和Ampr；多克隆位点 pUC系列质粒：2.674kb；Ampr