免疫组织化学技术进展及应用_课件.ppt

六、免疫组化染色技术的应用 在常规的病理诊断中，大多数病例是可以在普通的HE切片上作出明确的形态学诊断的，但也有约5-10%的特殊病例需要应用免疫组化染色来解决这一难题，特别是某些病例还需作出详细的分型以指导临床的治疗，以及预后的判断。 * 与病理诊断相伴随的是，更多的基因蛋白检测抗体的不断问世，免疫组化技术在肿瘤及其它疾病的病理、病因等诸多方面的研究也在不断走向深入，有力地促进了各学科领域的进展，在医学研究中发挥着不可忽视的作用。 * 归纳以下几条： 1：肿瘤良恶性的判断 2：肿瘤的分类和分型 3：指导肿瘤的临床治疗及预后判断 4：显示组织中的特殊成分 5：病原体的检测 6：用于肿瘤及其它疾病的组织学研究。 * ER PR CerbB2：ER PR阳性的乳腺肿瘤患者大多对内分泌治疗有效，缓解率高，复发率低，预后好。即使ER/PR中只有一项阳性的患者，其预后也好于两项全阴性的患者。CerbB2基因过度表达和扩增见于多种肿瘤，与肿瘤的分化程度和分级有密切关系，是肿瘤预后的参考指标，ER PR CerbB2三者同时阳性表达的患者进行三本氧胺治疗无效。ER PR阴性，CerbB2阳性的患者可用基因靶向药物赫赛汀治疗 * P53×100 * ER×100 * PR×100 * Her-2×100 * 胃肠道间质瘤CD117阳性患者可用基因靶向药物格列威进行治疗。 * EGFR（上皮生长因子受体）：表达于多种正常组织，特别是复层上皮和鳞状上皮的基底层。乳腺癌病人EGFR的过度表达，预示其生存期短，激素疗效差。西妥昔作为一种单抗抗肿瘤药物是EGFR的抑制剂，它可以结合肿瘤细胞EGFR位点，抑制肿瘤细胞增殖旁路，抑制肿瘤生长并促其凋亡。 * VEGF（血管内皮生长因子）：在体内可诱导血管新生。作用于血管内皮细胞，促进血管内皮细胞增殖，增加血管通透性。在肿瘤组织的血管形成中发挥重要作用。与肿瘤的生长，浸润和转移密切相关。 * 七、免疫组化操作中的细节问题及注意事项 * 1：组织的前期处理是做好免疫组化染色的保证。如固定及时与否、固定充分与否、脱水透明过分与否等，这些因素可使组织结构不清晰，抗原弥散，造成假阴性或假阳性。脱片。 * 2：载玻片需防脱片处理。 * 3：切片需4微米，裱贴牢固，没有气泡，烤片充分 * 4：脱蜡、脱二甲苯以及酒精等每一个步骤，要彻底干净。 * 5：熟悉免疫组化步骤及每一步的意义所在 * 6：注意一抗、二抗、所用标记酶及显色剂是否相互匹配。 * 7：抗体为高浓度的原液时，有必要对抗体的稀释度及反应时间进行摸索。 * 8：根据免疫组化方法的不同，考虑相关因素的干扰。 * 9：操作过程注意不要干片。 * 10：滴加抗体特别是一抗时，手、眼、心一致，认真核对，确保无误，否则会误导诊断。 * 11：了解每种抗体所标记的是何种组织或细胞，以及在组织细胞中的阳性部位。 * 12：关于封闭液的选用与否，可根据工作经验自行决断。 * 谢谢大家 * 思考题 1、概念： 免疫组化技术 抗原 抗体 酶 2、生物素检测系统特点 3、非生物素检测系统特点 * 免疫组织化学技术进展及应用 山西医科大学第二医院病理科 张晓琴 * 一、免疫组织化学技术的概念 免疫组织化学技术是利用抗原与抗体的特异性结合，并利用酶作用于底物，发生一系列化学反应显色，借助显微镜观察着色部位，从而鉴定组织或细胞结构的化学成分和化学性质的技术。 * 抗原：是一类在合适条件下，能激发机体免疫系统发生免疫应答，并能与免疫应答所产生的效应物质（包括抗体和效应细胞）在体内或体外发生特异性结合反应的物质。其两种性能a免疫源性b反应源性 * 抗原决定簇：又称抗原表位，决定抗原的特异性，是与相应抗体或淋巴细胞抗原识别受体相结合的部位，是决定和控制抗原特异性的特殊化学基团。 * 抗体：机体受到抗原刺激后，通过体液免疫应答，B淋巴细胞活化、增殖、分化成为浆细胞，由浆细胞合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的球蛋白（凝集素、调理素、沉淀素）。 * 抗体大部分位于r区带。r球蛋白并非都有抗原活性。免疫球蛋白是包括了抗体和化学结构与抗体相同或相似，但却无抗体活性的异常球蛋白 * * * 用以做标记的物质：生物素、地高辛、胶体金，荧光素、酶、同位素等。其中用于标记的酶有辣根酶、碱磷酶、葡萄糖氧化酶等等。 * 根据酶标记的对象的不同： 直接酶标法：将酶直接标记在特异性的抗体上。 间接酶标法：将酶标记在特异性抗体之外的其他参与反应的物质上。 * 根据酶在反应过程中扮演的角色不同： 酶标抗体法 抗原—抗体—酶标二抗—显色