蛋白透析时产生的絮状沉淀真的令不少人痛心不已,有时明1.docVIP

蛋白透析时产生的絮状沉淀真的令不少人痛心不已，有时明明看了又看，都没发现哪里不对，那么，这其中可能是哪里出现问题，还有这些问题从哪些方面着手解决最合适呢?请看下文分析：蛋白透析产生沉淀可能有以下原因：1.由高浓度的蛋白变性试剂(如8m尿素)，到低浓度，再到不含变性剂的buffer，如果条件变化剧烈，使得蛋白不正确折叠而沉淀，这种情况比较常见。如果选择透析的方法，一定要多加几个中间浓度梯度，而且注意低温(4度)，这有利于蛋白正确折叠。2.透析袋本身有一定的吸附，可以通过磁力搅拌来降低吸附。3.透析液PH靠近等电点，像catzp说的，换buffer。4.透析袋不干净?楼主不会范这种错误吧。或者没认真处理，有杂质、金属离子建议：1 可以采用梯度浓度透析，先采用与你纯化后蛋白盐浓度相近的透析液透析，4-8小时后换更小浓度的盐溶液透析，最后采用生理盐水或HYPERLINK /zt/product/pbs.htmlPBS(pH 7.4)透析。例如：用6M盐酸胍沉淀的目的蛋白，第一步透析可采用4M盐酸胍透析，4-8小时后采用2M盐酸胍透析，再之后可以使用PBS或生理盐水。2 透析液的pH值不要和目的蛋白的等电点接近，这样目的蛋白可能会更容易沉淀。3 保持蛋白浓度在mg/ml量级上面。4 用20mM的醋酸透析也能降低沉淀5 加一些保护剂，如蔗糖，甘油，巯基乙醇等。6 减少脱盐时间。可考虑用超滤或者