人感染H7N9禽流感采样及实验室检测技术.pptx

人感染H7N9禽流感采样以及实验室检测技术湖南省疾病预防控制中心微生物检验科黄一伟2014.8.21流感病毒流行性感冒病毒（简称流感病毒）： 是一种造成人类及动物患流行性感冒的RNA病毒，在分类学上，流感病毒属于正黏液病毒科理化特性： 对热敏感,56℃30min可灭活；最适pH为7.0～8.0，＜3.0和＞10.0感染力很快被破坏；对紫外线敏感；对乙醚、氯仿、丙酮等有机溶剂均敏感。 禽流感病毒灭活应该是65°30min，或者煮沸100°2min。 Dliu et al., Lancet, 2013 Gao RB, et al, NEJM,2013Morens DM et al, NEJM, 2013Yi Guan et al, Nature , 2013采样人员负责人感染H7N9禽流感病毒检测样本采集的操作人员必须经过生物安全培训合格，并具备相应的操作技能。样本采集过程中操作者要加强防护，应穿戴防护服、眼罩、N95及以上水平的医用防护口罩、帽子、双层医用乳胶手套、鞋套等个体防护装备。标本采集对象不明原因肺炎病例。同时具备以下4条的病例: 1. 发热(腋下体温≥38℃)； 2. 具有肺炎的影像学特征； 3. 发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计数减少； 4. 不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致的肺炎。人感染H7N9禽流感疑似病例 样本类型◆上呼吸道标本（包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液）；◆下呼吸道标本（如气管吸取物、肺洗液、肺组织标本）；◆ 血清标本；◆ 如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸检，及时进行尸体解剖，采集组织（如肺组织、气管、支气管组织）标本；注：应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼吸道标本）和发病7天内急性期血清以及间隔2-4周的恢复期血清。要求呼吸道标本：发病早期采样，每份不少于3ml血清标本每份分为2管，每管不少于0.5ml样本采集方法 (1)咽拭子：左手用压舌板压住患者舌头，右手用2根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时檫拭双侧咽扁桃体及咽后壁，应避免接触舌头，将拭子头浸入含3ml采样液的管中，弃去尾部，旋紧管盖。样本采集方法 (2)鼻拭子：将1根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处（通常5cm以上），停留片刻后缓慢转动退出；取另1根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子以同样的方法采集另一侧鼻孔；将上述2根拭子浸入同一含3ml采样液的管中，弃去尾部，旋紧管盖。患儿俯卧抬头，采集者左手托住患儿的下颌部，右手持无菌拭子，将干拭子与上颚平行插入鼻孔（不要向上）直接与鼻咽后壁接触，深度与到耳导管基本一致，轻轻旋转5秒吸附分泌物，慢慢移出拭子，将拭子头浸入采样液中，弃去尾部。样本采集方法 (3)拭子的要求： 标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维）铝或塑料做柄，不推荐棉拭子和木柄标本采集管应包含3毫升病毒采样液（含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液）采样液中不能加入血清作为蛋白保护剂，可以加入BSA作为蛋白保护剂，加入BSA的采样液应-20℃保存备用。也可加入凝胶（gelatin）作为蛋白保护剂。使用商品化的无菌采样液，在分离病毒时需补加抗生素。样本采集方法 (4)鼻洗液 患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5 ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。重复此过程洗两侧鼻孔漱口液 用10 ml生理盐水漱喉。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理盐水在咽部转动。然后，用50ml的无菌螺口塑料管收集洗液。血清标本 用真空负压采血管采集血液标本5ml，室温静置30分钟，1500～2000rpm离心10分钟，收集血清于2ml无菌螺口塑料管中。样本采集方法 (5)鼻咽抽取物或呼吸道抽取物： 用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取呼吸道分泌物。先将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出；收集抽取的粘液，并用采样液3ml涮洗收集器1次（可用小孩导尿管接在50ml注射器上来代替收集）。呼吸道灌洗液： 将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气管（约30cm深处），注入5ml生理盐水，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出；收集抽取的粘液，并用采样液涮洗收集器1次（可用小孩导尿管接在50ml注射器上来代替收集）。禽流感环境标本采集采集粪便时一定要采集新鲜的（一般较湿润）粪便，太陈旧（干燥）的粪便对我们的检测意义不大；在养殖户家中采集粪便标本时，由于多鸡鸭混养难以分辨鸭粪和鸡粪，最好能找到鸭子刚排泄的新鲜粪便；采样液中最好已加入抗生素，否则回实验室要先加入抗生素处理；样本的运输 1、病毒培养物按照A类感染性物质进行包装运输，其他感染性物质按照B类感染性物质进行包装运输。 2、病例的临床标本采集后，