实验九 姐妹染色单体差别染色浅析.pptVIP

实验九 姐妹染色单体差别染色 作业 完成此次实验报告(包含实验原理、实验药品、实验步骤） * * 实验用品 1、器材：水浴锅、紫外灯、温度计、擦镜纸、 显微镜、滴管 2、试剂： 2×SSC缓冲液、Giemsa染液、 PH6.8 PBS、 3、材料：人外周血淋巴细胞染色体标本片 1、姐妹染色单体差别染色 A、将标本片放入培养皿中，加2×SSC数滴于玻片上，盖一张擦镜纸，以湿润擦镜纸为宜，并在培养皿中加入2×SSC使之浸在玻片底面。 B、把培养皿置于预温75℃水浴锅平板上，距30W紫外灯管5cm，照射30分钟，其间滴加数次2×SSC，勿使擦镜纸干燥。 C、用Giemsa染液染色10分钟，自来水冲洗、晾干即为SCE标本。 实验步骤 2、SCE观察计数 镜下（油镜）观察中期分裂相时，注意区分各细胞周期分裂相的染色特点：①染色体的两个单体均为深染的细胞记为第一周期的细胞；②染色体的两个单体染色一深一浅的细胞为第二周期细胞；③部分染色体的两个单体染色都为浅色的细胞为第三周期的细胞。 第二周期细胞 选择染色体分散良好、长度适中、轮廓清晰、数目完整、分化良好的的第二周期的分裂相进行计数。人体姐妹染色单体交换（SCE）的计数方法： ①凡是在染色单体端部出现互换，记为1次交换； ②在染色单体中间出现互换，记为2次交换； ③如果在着丝粒处发生交换，需判明是否为扭转，不是扭转的为着丝粒部位交换，记为1次交换。每一份标本至少需要计数20~50个细胞的染色体，计算SCE平均交换频率。 SCE平均交换频率（次/细胞）= 交换总次数 / 细胞数