乙肝病毒前SI抗检测操作规程.docVIP

标准化操作规程 免疫室鄱阳湖第二医院检验科乙肝病毒前SI抗检测操作规程1、检验目的乙型肝炎病毒前S1抗原是乙型肝炎病毒感染和复前的重要血清标志。因此在急性乙型肝炎病毒感染的早期检测PRE-SI抗原可作为早期诊断HBV感染的依据，并可弥补某些HBeAg呈阴性急性感染的不足，在慢性HBV感染中PRE-SI抗原持续阳性提示病情进展和恶化，从而为临床提供HBV感染的辅助诊断。2、检测原理乙型肝炎病毒前SI抗原检测试剂盒（酶联免疫法）采用夹心法原理，在微孔板预包被抗-HBV PRESI羊抗隆抗体，与血清中乙型肝炎病毒前SI抗原反应，再加入辣根过氧化物酶标记的乙型肝炎病毒表面抗原（抗-HBS-HRP）形成免疫复合物，加入TMB等显色底物呈显色反应。3、标本要求采用血清或血浆，细菌片集、严重溶血或脂血标本不能作测定。临床上一般和乙肝二对半同做，合称“乙肝三对”。标本7天内检测，可放2—8℃保存。4、试剂4.1试剂名称：乙型肝炎毒前SI抗原检测试剂盒4.2生产厂家：厦门英科新创科技有限公司4.3包装规格：48T/盒，96T/盒4.4试剂盒组成：PRE-SI微孔板（48T/96T）、酶标记抗体、阳性对照、阴性对照、浓缩洗涤液、底物A、底物B、终止液。4.5储有条件及有效期：2—8℃5、仪器设备——酶标仪、——洗板机、37℃水浴箱、振荡器、离心机、连续加样枪。6、操作步骤6.1取出试剂盒，在室温下权置30分钟使之平衡至室温6.2浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1:19稀释后使用，浓缩洗涤液配置充分摇匀。6.3编号：取所需数量微孔条固定于支架，按序编号，每板应度阴、阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照不加样本及酶标物，其余各步相同）。6.4加样：分别用加样器加入阴、阳对照血清各50于相应孔中。6.5加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50 ，轻拍混匀。6.6温育：置37℃6.7洗涤：用洗涤液充分涤涤5次，洗涤完后拍干6.8显色：每孔加入底物A、B各50，轻拍混匀，37℃6.9测定：用酶标仪单波长450或双波长450/630nm测定多孔OD值（用单波长测定时，需设空白对照孔校零）6.11结果判断6.11.1 临界值（C.O）的计算 临界值（C.O）=阴性对照孔OD值N×4（阴性对照孔OD均值＜0.05以0.05计）6.11.2判断样品OD值S/C.O≥1者为乙型肝炎病毒SI抗原阳性样品OD值S/C.O＜1者为乙型肝炎病毒SI抗原阴性阳性对照OD值≤0.4时，实验无效，应重新试验乙型肝炎病毒表面抗原（胶体金法）检测操作规程1、检验目的以定性的方法快速检测全血（或血清/血浆）中乙肝表面抗原（HBSAg），临床常用于无偿献血员现场初筛及临床急症手术前检测HBSAg。2、检测原理本品采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维素膜上预包被金标HBSAg单抗（AU-SABb1），在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被抗HBSAg单抗（SAb2）和羊抗鼠lgG，检测阳性血清或血浆样本时，样本中HBSAg与胶体金标记抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗体结合形成“Au-sAb1-HBsAg-sAb2”夹心物而凝聚显色，游离金标抗体则在对照线处与羊抗鼠lgG结合而富集显色。阴性标本则3、样本要求可采用全血、血清、血浆进行检测，血浆样本对抗凝剂无要求。如果血清或血浆样本收集后7天内的检测，样品须放在2-8℃保存。全血样本建议在三天内检测，样品放在2-8℃保存，不得冻存。4、试剂 4.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（胶体金法） 4.2生产厂家：厦门英科新创科技有限公司 4.3包装规格：25人份/盒，40人份/盒，50人份/盒，100人份/盒，200人份/盒。 4.4贮存条件及有效期：4-30℃5、操作方法 5.1将试纸条取出，粘贴于不干胶记录纸上相应位置，水平放置并作好标记。 5.2 用加样器或毛细管吸取60ul新鲜全血（或血清、血浆）缓慢滴加于试纸条箭头下方的垫片上（所配毛细管容量为60ml）5.3 为防止弱阳标本的漏检，请于加样后10分钟观察并记录实验结果。6、结果判断 阳性：试纸在检测线和对照线位置出现两条紫红色 阴性：试纸只在对照线位置出现一条紫红线， 失效：试纸未出现紫红线或仅在检测线出现一条紫红色线。7、注意事项 7.1 实验应在加样后10分钟判读结果，只须在检测处出现紫红线，即可判断为阳性结果。 7.2 辅助液使用说明：若所加全血样本过于粘稠或样本量较少，会影响样本在试纸上的扩散速度，此时可在加样区缓慢加入1滴辅助液，以助于样本的扩散。戊型肝炎病毒IgM抗体（酶联免疫法）操作规程1、检验目的 用于体外人血清或血浆样本中戊型肝炎病毒IgM抗