免疫学试验的室内质量控制-焦作中心血站.PPT

免疫学实验的室内质量控制 焦作市中心血站 张国平 血站实验室的室内质控 室内质量质控的概念 如何进行室内控制 如何进行统计学质量控制 如何做质控图 质控规则的选择 一、室内质量控制的概念 由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。 可概括为:(1)执行者：实验室技术人员；(2)目的：监测实验室测定的重复性；(3)功能：决定了当批测定的有效性，报告可否发出。是对实验室测定的即时性评价。 二、分析前的质量控制 2.1 人员培训? 免疫学实验的基本原理 临床意义 易出差错的环节及难点 熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成） 熟悉检测仪器的原理及性能； 掌握数据处理的能力和质量控制知识 三、ELISA实验的室内质量控制 3.1 最佳条件下的变异（OCV） 在本实验室最佳条件下（包括操作者、试剂、仪器等）检测质控血清20-30次，测得结果计算，求出该组数据的均值、标准差（SD）和变异系数（CV），表示实验室的最佳工作质量。 3.3 常规条件下未知值质控血清变异(RCVU)的测定 　 测定步骤同RCVK，但检测的操作者不知质控血清的定值，或在操作者不知哪份是质控血清的条件下进行常规检验，以排除操作者的主观性。 3.5 质控规则的功能 简单地说就是用于判断测定批的失控还是在控。 失控信号的出现受多种因素的影响，包括操作上的失误、试剂、校准物、质控品的失效，仪器维护不良以及采用的质控规则、控制限范围、一次测定的质控标本数等等。 排除假失控。 3.6 质控规则的表达方式 通常质控规则以符号AL来表示，其中A为质控测定中超出质量控制限的测定值的个数，L为控制限，通常用均值或均值±1～3SD来表示。 当质控测定值超出控制限L时，即可将该批测定判为失控。 常用的13S质控规则，其中1为原式中的A，3s为原式中的L，表示均值±3s，其确切的含义为：在质控测定值中，如果有一个测定值超出均值±3s范围，即可将该批测定判为失控。 常用质控规则的符号及定义 符 号 定 义 12S 一个质控测定值超出±2s控制限。 13S 一个质控测定值超出±3s控制限。 22S 两个连续的质控测定值同时超出+2s或-2s 控制限。 R4S 同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间的差值超出4s控制限。 41S 四个连续的质控测定值同时超出+1s或－1s控制限。 7T 七个连续的质控测定值呈现一个向上或向下的趋势变化。 10X 十个连续的质控测定值同时处于均值的同一侧。 四、“即刻法”质控 “即刻法”质控方法是在对同一批外部质控血清连续测定3次后，即可对第3次检验结果进行质控。具体计算方法如下： 4.1 将质控血清的测定值从小到大排列：x1，x2，x3……xn(x1为最小值，xn为最大值) 4.2 计算 X 和 S。 五、影响ELISA实验的常见原因 5.1 试剂准备 操作前将试剂在室温下平衡30-60分钟。 5.2 加样: 血清或血浆标本分离不好即进行加样 手工操作中，加样过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时)； 加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。 样品、稀释液、酶结合物 、显色剂应加在微孔底部。 * * 2.2 试剂盒选择 有生产批准文号、批批检报告，并贴有防伪标签。 从灵敏度，特异性，精密度，稳定性，简便性，安全性及经济性作出全面的评价 使用血清考核盘进行检测 参考室间质评评价报告中对试剂的评价结果 注意高值钩状效应（HOOK） 2.3 仪器校验 移液器（加样枪） 水浴箱（温箱） 洗板机 酶标仪 全自动加样仪 全自动酶免分析系统 2.4 标本的采集、处理、保存 标本避免溶血。 抗凝不完全可造成假阳性。 血清置4℃冰箱不应超过5天。如需保存一周以上则要-20℃冰冻保存，融解时应 充分混匀，避免产生气泡。 避免标本间的污染 3.2 常规条件下已知值质控血清的变异（RCVK） 　 做常规检验的技术人员，在常规检验的条件下，将质控血清作为常规检测样本，进行20次检验，结果计算同OCV法。 3.4 绘制质控图 根据质控品的靶值和控制限绘制Levey-Jennings控制图（每张图一个浓度水平），将选择的质控规则应用于质控数据，判断每一分析批是在控还是失控。 4.3 计算SI上限值 和SI下限值 SI下限= X - X最小值