2008研分子生物学答案.DOCVIP

2008研分子生物学答案Key A1、molecular clone：分子克隆，应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质（同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA）与载体DNA接合成一具有自我复制能力的DNA分子——复制子(replicon)，继而通过转化或转染宿主细胞，筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增提取获得大量同一DNA分子，也称基因克隆或重组DNA 2．C value paradox：C值矛盾,形态学复杂度与C值大小不一致(1.5分)的C值反常现象称之(1.5分)。3．Pseudogene: 假基因,在多基因家族中某些与正常功能基因在核苷酸序列上相似(1.5分)，但不能转录或转录后生成无功能基因产物的DNA序列，被称为假基因(1.5分)。4.Gene family:基因家族, 真核生物基因组中许多来源相同、结构相似(1.5分)、功能相关的基因在染色体上成串存在(1.5分)。5. plasmid：质粒， 低等生物体内，染色体以外能自主复制的小型环状双链DNA分子。6. 实时荧光定量PCR：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。7转基因（transgenesis）:是借助基因工程将确定的外源基因导入动植物的染色体上，使其发生整合并遗传的过程。8 siRNA: siRNA即为能够以同源互补序列的mRNA为靶目标,并将其降解而介导RNA干扰途径的21-23nt的双链RNA分子二、简答题1、试述探针的种类及主要的标记方法答：按来源及性质划分：核酸探针分为DNA探针、cDNA探针、RNA探针和人工合成的寡核苷酸探针等几类。按标记物划分：有放射性标记探针和非放射性标记探针两大类。探针标记方法：放射性标记有体内标记法及体外标记法 。体外标记法不需要活体生物，所得探针放射性较高。故一般用体外标记法。体外标记法有两种：化学法和酶法。 2.叙述反义核酸用于基因治疗存在的问题。答：1）因为肿瘤转化往往涉及到各种异常基因且尚不明确，单一癌基因反义阻断不可能完全抑制或逆转肿瘤的生长，需要多种反义核酸联合应用或许效果好些(2分)。2）反义核酸在机体内的靶向性（特异性）是治疗的关键问题若不能达到特异性靶器官、靶组织、靶细胞，即使对靶分子有特异针对性也没有效果(2分)。3）反义核酸的代谢问题，目前所用反义载体及反义寡核苷酸都存在体内迅速失活的问题，不尽人意，函待解决(2分)。3．蛋白质相互作用的研究方法有哪些？答：A.常规方法*化学交联法(0.5分)*GST融合蛋白pull-down实验(0.5分)*酵母双杂交(1分)*免疫共沉淀(0.5分)*噬菌体展示(0.5分)B.生物物理学方法*荧光共振能量转移技术(0.5分)*绿色荧光蛋白质近似成像技术(0.5分)*质谱(1分)*原子作用显微技术(0.5分)*表面胞质团共振技术(0.5分)4转基因动物的基本原理： 将目的基因（或基因组片段）－用显微注射等方法－注入实验动物的受精卵或着床前的胚胎细胞中－使目的基因整合到基因组中－然后将此受精卵或着床前的目的胚胎细胞再植入受体细胞输卵管（或子宫）中，使其发育成携带有外源基因的转基因动物－人们可以通过分析转基因和动物表型的关系－揭示外源基因的功能，也可通过转入外源基因培养优良的动物品种。5.目的基因获得的方法：1）.化学合成法要求：已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列 。2）.基因组DNA文库(genomic DNA library)3）. cDNA文库(cDNA library)4）. 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)6. 原核表达体系 （E.coli表达体系最为常用）标准：选择标志 强启动子 翻译调控序列 多接头克隆位点E.coli表达体系的不足 不宜表达真核基因组DNA不能加工表达的真核蛋白质表达的蛋白质常形成不溶性包涵体 (inclusion body) 很难表达大量可溶性蛋白真核表达体系 优点：可表达克隆的cDNA及真核基因组DNA可适当修饰表达的蛋白质表达产物分区域积累缺点：操作技术难、费时、经济三 问答题：1.蛋白质空间结构测定的方法有哪些？答：1.X射线晶体衍射法(1.5分)2.二维磁共振技术(1.5分)3.预测空间结构(1分)4.分子动力学(1分)5.分子力学(1.5分)6.生物信息学（bioinformatics）(1.5分)2试述哪些分子生物学技术可以分别从DNA水平、RNA水平及蛋白质水平进行核酸分析？答：DNA分析可从不同角度对基因和基因组进行研究（一）基因和基因组一级结构变化解释基因和基因组一级结构变化：DNA序列测定核酸序列分析的基本原理: 化学裂解法(Maxam