第七讲发酵工程建设在现代生物技术中的运用.pptVIP

二、培养基的灭菌方法 （1）分批灭菌 分批灭菌是在每批培养基全部流入发酵罐后，就在罐内通入蒸汽加热至灭菌温度，维持一定时间，再冷却到接种温度。实罐灭菌时，发酵罐与培养基一起灭菌。 不需要附属设备，操作简便，常用的灭菌方法 加热和冷却时间较长，营养随时间降低，罐利用率低；不能采用高温快速灭菌工艺。 发酵罐溶积越大，加热冷却时间越长 T总=t1+t2+t3 式中t1、t2、t3分别为加热、维持、冷却所需要的时间 其他灭菌设备一般采用蒸汽灭菌，如设备十分耐压，则可采用较高的温度，但必须注意设备内部的凹处及露出的小配管等蒸汽不能到达的部位。 （2）连续灭菌 连续灭菌也叫连消，是指培养基在发酵罐外经过一套灭菌设备连续的加热灭菌，冷却后送入已灭菌的发酵罐内的灭菌工艺流程。 其温度一般以126～132℃为宜，总蒸汽压力要求达到0.044～0.049MPa以上。 优点 营养成分破坏少；发酵罐非生产占用时间短，溶积利用率提高；蒸汽负荷均衡，锅炉利用率高，操作方便；适用于自动化控制，降低劳动强度。 缺点 不适用于黏度大或固形物含量高的培养基的灭菌；增加了一套连续灭菌设备，增加了操作环节，增加了染菌的概率。 按设备和工艺条件分 （1）蒸汽直接加热 （2）蒸汽间接加热 1、蒸汽直接加热连续灭菌系统 定义：蒸汽通入培养基中，快速加热至杀菌温度，维持一段时间，后冷却至发酵温度的过程。分两种形式： （1）由连消塔、维持罐和冷却器组成 ●配料罐将培养基预热60-70℃，防止培养基在杀菌时料液与蒸汽温度相差过大而产生水汽撞击声。 ●连消塔使培养基迅速(20s)升温(126-132℃)。 ●维持罐：使培养基温度保持在灭菌温度下一段时间。2-7min. ●冷却管：将培养基迅速冷却到40-50 ℃，输送到灭菌后的发酵罐内 连续灭菌流程 培养基配料 配料罐 加热器 维持罐 冷却器 无菌培养基 （2）喷射加热连续灭菌流程 由喷射加热、维持罐和真空冷却器组成的连续灭菌系统。 蒸汽直接喷入待灭菌的培养液，培养液急剧升温到预定的灭菌温度，培养基在该温度送入维持管维持一段时间后，通过一膨胀阀进入真空冷却器冷却。 保证培养基先进先出，避免过热或者灭菌不彻底 升温快、营养损失小 随着蒸汽的冷凝使培养基稀释 2、蒸汽间接加热连续灭菌系统 蒸汽不直接与培养基接触，而是通过热交换器对培养基进行加热。 热交换器有板式和螺旋板式两种 螺旋板式交换器的特点：流道宽，流速快，可减少热交换器表面结垢现象。适用于含有固行悬浮物的培养基的灭菌。 板式交换器的特点：适用于含有少量固行悬浮物的培养基的灭菌。 温度随时间的变化 连续灭菌与分批灭菌的比较与选择 分批灭菌 优点： 1.不需附加设备 2.蒸汽利用率高 3.节约劳动力 ?缺点 1.培养基质量差 2.罐的利用率低 3.冷却水用量大 连续灭菌 优点： 1.采用高温快速灭菌法 2.可以把培养基按其性质分开灭菌 3.有利于自动控制 4.节省冷却水 缺点 1.投资费用高 2.对物料要求高 3.蒸汽用量大 三、发酵设备灭菌 实罐灭菌时，发酵罐与培养基一起灭菌 连续灭菌时，发酵罐、种子罐等要先进行空罐灭菌。0.147-0.180MPa，维持45-60min。 空消后不能立即冷却，先保压，待培养基进入后，再开冷却系统。 附属设备：空气过滤器、补料系统和消泡剂系统等。 各个管路在灭菌前，要严格检查，以防泄露和“死角”的存在。 发酵工程在现代生物技术中的应用 生物技术：应用自然学和工程学的原理，依靠生物作用剂的作用将生物物料进行加工以提供产品和为社会服务的技术。 20世纪70年代以后，以DNA重组技术的建立为标志，形成了一个以基因工程为主导，发酵工程为中心，包括细胞工程和酶工程的现代生物技术体系。 第一节 基因工程菌发酵 一、基因工程技术 通过对核酸分子的插入、拼接和重组而实现遗传物质的重新组合，借助载体将重组的目的基因转移新的宿主细胞体系，并使目的基因在新的宿主体系细胞中进行复制扩增和表达所需的目的产物。 基因工程菌的制备 一、目的基因的制备 1.鸟枪法 选用合适的内切酶，在Mg2+的激活下，切开供体DNA链获得目的基因，根据酶切末端特点分为a、b两类。 基因工程菌的制备 2.cDNA法 又称反转录法，从细胞内提取目的基因的mRNA，在反转录酶的作用下，以mRNA反转录互补的cDNA。 3.人工合成