高中生物第一单元生物技术与生物工程第一章基因工程和蛋白质工程第1节基因工程的原理学案中图版选修3.docVIP

第一章　基因工程和蛋白质工程第一节　基因工程的原理1．简述基因工程的诞生。2．简述基因工程的原理及技术。(重点)3．尝试DNA的提取与鉴定。(难点)基 因 工 程 的 诞 生 与 操 作 工 具1．诞生历程时间科学家事件1967年发现了DNA连接酶1970年史密斯等首次提取出核酸限制性内切酶提取了T4DNA连接酶1972年伯格等构建了世界首例体外重组的杂合DNA分子1973年科恩等成功培育出双重抗性大肠杆菌2.操作工具(1)核酸限制性内切酶——“基因手术刀”(2)DNA连接酶——“基因缝纫针”①作用：将两个DNA片段连接起来，修复被限制性内切酶切开的切口，拼接成新的DNA分子。②种类：T4DNA连接酶(把限制性内切酶切开的黏性末端的缝隙“缝合”起来)。(3)载体——“分子运输车”①载体的特点ⅰ.外源DNA的插入不影响载体在宿主细胞内的自我复制。ⅱ.有适宜的限制性内切酶酶切位点，最好是对多种限制性内切酶有单一切点。ⅲ.具有某些标记基因。ⅳ.载体应对受体细胞无害。②载体的种类：ⅰ.质粒：它是细菌中独立于细菌DNA之外的小型环状DNA分子。ⅱ.噬菌体或其他一些病毒。eq \a\vs4\al([合作探讨])探讨eq \a\vs4\al(1)：下图表示限制性内切酶切割某DNA分子的过程，从下图中可知，该限制性内切酶能识别的碱基序列及其切割位点是什么？提示：GAATTC，切点在G和A之间。探讨eq \a\vs4\al(2)：结合DNA复制的过程分析，限制性内切酶和DNA解旋酶的作用部位有何不同？提示：限制性内切酶作用于磷酸和脱氧核糖之间的磷酸二酯键，DNA解旋酶作用于两个碱基之间的氢键。探讨eq \a\vs4\al(3)：如图，两个核酸片段在适宜条件下，经X酶的催化作用，发生了下述变化，则X酶是什么？提示：DNA连接酶。eq \a\vs4\al([思维升华])1．核酸限制性内切酶(1)来源和种类切割DNA的工具是核酸限制性内切酶，又叫限制酶，这类酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。迄今已分离出的约有4 000种。(2)作用限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。(3)识别序列的组成一般由6个核苷酸组成，少数由4、5或8个核苷酸组成。(4)作用结果当限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是黏性末端；而当限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生的则是平末端。【特别提示】　①限制酶作用的结果通常有两种形式——黏性末端或平末端；②限制酶的作用特点体现了酶的专一性。2．DNA连接酶(1)分类根据DNA连接酶的来源不同，可以将这些酶分为两类：①从大肠杆菌中分离得到的DNA连接酶，称为E·coli DNA连接酶；②从T4噬菌体中分离出来的DNA连接酶，称为T4DNA连接酶。(2)作用这两类酶都是将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。【特别提示】　E·coli DNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。而T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链DNA片段的平末端，但连接平末端之间的效率比较低。3．载体(1)常用载体——质粒质粒是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的小型环状DNA分子。(2)载体的条件①能够在宿主细胞中稳定地保存，并能够复制，以便提供大量的目的基因；②具有多个限制酶切割位点，便于与外源基因结合；③具有标记基因，便于进行检测和筛选。(3)其他载体在基因工程中使用的载体除质粒外，还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。1．下列关于限制酶和DNA连接酶的理解正确的是(　　) A．其化学本质都是蛋白质B．DNA连接酶可以恢复DNA分子中的氢键C．在基因工程操作中可以用DNA聚合酶代替DNA连接酶D．它们不能被反复使用【解析】　限制酶和DNA连接酶的化学本质均为蛋白质，DNA连接酶的作用是将两个DNA片段连接起来，DNA聚合酶的作用是把单个脱氧核苷酸连成脱氧核苷酸链。【答案】　A2．核酸限制性内切酶 Ⅰ 的识别序列和切点是—G↓GATCC—，核酸限制性内切酶 Ⅱ 的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶 Ⅰ 的一个切点，在目的基因的两侧各有一个酶 Ⅱ 的切点。(1)请画出质粒被限制酶 Ⅰ 切割后所形成的黏性末端。(2)请画出目的基因两侧被限制酶 Ⅱ 切割后所形成的黏性末端。(3)在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后的片段是否可以连接？为什么？【解析】　本题考查核酸限制性内切酶切割DNA的方式，将限制酶能识别的序列写出，再将限制酶切点处标出，可用虚线画出，然后可沿着虚线将片段一分