PCR反应条件的确定变性退火延伸循环数.PPTVIP

35 35 35 实验二、 目的基因片断的体外扩增 讲解 （2） 一、PCR 的概念 二、PCR 的基本原理 三、PCR 的基本流程 四、PCR反应体系的各成分及其对PCR的影响 讲解内容 (2) 五、PCR反应条件的确定 六、常见问题与对策 变性 退火 延伸 循环次数 主要包括： Half life of Taq DNA polymerase 一般选用94～95 ℃。 92.5 ℃ 2 hours， 95 ℃ 40 mins， 97 ℃ 5 mins. 30 个循环时， 变性温度： 变性时间： 可根据模板长短、G+C含量确定。 一般采用30～45秒。 五、PCR反应条件的确定 变性共需要 15 ~ 22.5 min。 热启动 : 94℃（或95℃）, 3～10min 变性 退火 延伸 循环次数 主要包括： 五、PCR反应条件的确定 退火是影响 PCR 特异性的重要因素！ (2) Annealing temperature is too high Primers and templates te