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蛋白质存在于所有的生物细胞中，是构成生物体最基本的结构物质和功能物质。 蛋白质是生命活动的物质基础，它参与了几乎所有的生命活动过程。 1 蛋白质的结构组成 蛋白质是一类含氮有机化合物，除含有碳、氢、氧外，还有氮和少量的硫。某些蛋白质还含有其他一些元素，主要是磷、铁、碘、碘、锌和铜等。这些元素在蛋白质中的组成百分比约为： 碳 50％ 氢 7％ 氧 23％ 氮 16% 硫 0—3％ 其他 微 量 氨基酸的光吸收 构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，但在远紫外区(220nm)均有光吸收。 在近紫外区(220-300nm)只有酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸有吸收光的能力。 酪氨酸的?max＝275nm，?275=1.4x103; 苯丙氨酸的?max＝257nm，?257=2.0x102; 色氨酸的?max＝280nm，?280=5.6x103; 氨基酸的离解性质 氨基酸在结晶形态或在水溶液中，并不是以游离的羧基或氨基形式存在，而是离解成两性离子。在两性离子中，氨基是以质子化(-NH3+)形式存在，羧基是以离解状态(-COO-)存在。 在不同的pH条件下，两性离子的状态也随之发生变化。 氨基酸的等电点 当溶液浓度为某一pH值时，氨基酸分子中所含的-NH3+和-COO-数目正好相等，净电荷为0。这一pH值即为氨基酸的等电点，简称pI。在等电点时，氨基酸既不向正极也不向负极移动，即氨基酸处于两性离子状态。 侧链不含离解基团的中性氨基酸，其等电点是它的pK’1和pK’2的算术平均值：pI = (pK’1 + pK’2 )/2 同样，对于侧链含有可解离基团的氨基酸，其pI值也决定于两性离子两边的pK’值的算术平均值。 酸性氨基酸：pI = (pK’1 + pK’R-COO- )/2 碱性氨基酸：pI = (pK’2 + pK’R-NH2 )/2 PH 1 7 10 净电荷 +1 0 -1 正离子 两性离子 负离子 等电点PI * 分子生物学实验技术 郭秋平 核酸和蛋白质的基本性质 及实验操作注意事项 蛋白质 一、核酸的基本性质 核酸：是以核苷酸为基本组成单位的生物信息大分子。核酸可以分为脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）和核糖核酸（ribonucleic acid，RNA）两大类。 核酸（DNA和RNA）是线性多聚核苷酸， 基本结构单元是核苷酸 DNA与RNA结构相似，组成成份上略有不同 核酸的组成 核酸 核苷酸 磷酸 核苷 戊糖 碱基 水 解 核 酸 代表碱基 代表磷酸基 核苷酸 代表戊糖，对DNA而言为脱氧核糖，对RNA而言为核糖； DNA的一级结构 DNA的一级结构是指DNA分子中核苷酸的排列顺序 ,DNA从结构上来说是由脱氧核糖核苷单磷酸通过3，5磷酸二酯键连接而成的高聚物。从同一个磷酸基的3’酯键到5’酯键的方向定为链的方向。在大多数天然DNA分子长链的两端，总是有一个核糖带有自由的5’磷酸，而另一端的核糖带有自由的3羟基，前者称为5端，后者称为3’端。DNA链的方向就是从5端到3端。 DNA 序列 DNA分子一级结构中的显著特点，顾名思义，就是脱氧核糖了。也就是核糖的２’位上没有自由羟基．这也就是DNA这一主要遗传物质极其稳定的根本原因。特别是对于碱的抵抗力，在pH１１．5时，DNA链的一级结构几乎没有任何变化，而RNA链在几分钟内降解为2’单磷酸核苷和3’单磷酸核苷。RNA碱水解先生成一个2，3环式单核苷酸中间产物，由于是一个五员环，稳定性较差，很快转变成2单核苷酸和3单核苷酸. 2’ DNA一级结构的重要意义不仅在于它蕴藏了遗传信息(以密码子的方式)，而且还决定了 DNA的二级结构和空间结构 。 一、核酸杂交的基本理论 －－DNA的变性和复性 DNA的二级结构 －Watson-Crick 右手双螺旋结构 （1）主链脱氧核糖和磷酸基通过3，5磷酸二酯键交互连接，成为螺旋链的骨架。 （4）大沟和小沟