二密度梯度离心法分离提纯叶绿体及叶绿体荧光观察.PPTVIP

实验六 植物细胞骨架的制片及光学显微镜观察 一、实验目的 ?掌握细胞染色的基本过程及非切片法制片技术，了解细胞骨架的结构 二、实验原理 细胞内脂质和大部分蛋白质可与去垢剂Triton-100形成去垢剂-蛋白/脂质复合物，从而溶于水中被提取，而结合成纤维状的微丝束属于不可溶性蛋白，就不会被Triton-100破坏而保持其在生活细胞中存在的状态。之后用考马斯亮蓝R250对蛋白质染色，使骨架系统在光学显微镜下可见，从而对其进行观察研究。 三材料与方法 3.1 材料 新鲜洋葱鳞茎，撕取内表皮，切成约0.5cm×0.5cm大小。 3.2 器材 光学显微镜、精确天平、0.02ml移液枪、50ml烧杯、玻璃滴管、容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子。 3.3 试剂： M-缓冲液：50mmol/L咪唑、50mmol/LKCl、0.5mmol/LMgCl2、0.1mmol/LEDTA、1mmol/LEGTA[乙二醇双（α-氨基乙基）醚四乙酸]、1mmol/L巯基乙醇。 6mmol/LPH6.8磷酸缓冲液：0.2149g Na2HPO4·12H2O、0.0816g KH2PO4 加入100ml 蒸馏水。 1％TritonX-100：0.5ml 100％TritonX-100加入A液49.5ml。 0.2％考马斯亮蓝R250：0.2g考马斯亮蓝R250粉加入甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸馏水46