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99 第二章 细胞分离与破碎 固液分离的类型 1、过滤(重力过滤器、压滤器、真空过滤器) 2、离心 3、重力沉降 发酵液的组成 悬浮液： 指固体颗粒在0.1?m以上的固液分散体系。生物细胞培养液基本上也是悬浮液。 培养液的组成： 水70-80% + 固体细胞及碎片20-30%(对微生物发酵)+ 少量的代谢成物 + 细胞破裂后的内容物 + 残存的培养基成分 培养液的基本特征 A、细胞成分及碎片大小不一，颗粒大小?，分离成本?。 B、固液密度相近，黏度高：沉降和离心分离困难 C、固体成分可压缩可变形 + 高黏度：过滤困难，黏附在滤布，错流过滤形成凝胶层 D、动植物细胞抗剪切力差：错流膜过滤和离心等不适 E、流变性复杂，非牛顿型流体。青霉素发酵液为卡森型流体，120h链霉素发酵液为拟塑性流体，灰色链丝菌发酵液为塑性流体。 这些 造成细胞难于分离 备注 在高分子液体范畴内，可以粗略地把非牛顿型流体分为： 纯粘性流体，但流动中粘度会发生变化，如某些涂料、油漆、食品等。 粘弹性流体，大多数高分子熔体、高分子溶液是典型的粘弹性流体，而且是非线性粘弹性流体。一些生物材料，如细胞液，蛋清等也同属此类。 流动性质有时间依赖性的流体。如触变性流体，震凝性流体。 对微小而形状多变的微生物细胞，发酵液和其它生物溶液的固液分离就变得复杂了 。 一般，由于料液通常都是高的非牛顿粘度流体或者是高度可压缩滤饼，发酵液和其它生物溶液是极其难以过滤的，因此，必须对这些生物分离程序进行修改。 预处理 预处理的目的: 改变发酵液的物理性质 (黏度、颗粒大小?、颗粒稳定性等)， 固液分离速度?，分离器分离效率?。 目标产物转移其中一相 (多数为液相)； 1、 加热 最简单、最经济的预处理方法是加热，加热不仅可以增加料液的操作特性，也可以对其进行灭菌。但加热变性的方法只适合于对热稳定性的产物。 加热可产生： ?黏度、促凝聚、?固体成分体积、破坏凝胶结构、增加空隙率、去蛋白 3、凝聚和絮凝 通过电解质 的加入促进原始溶液的凝聚和絮凝 主要作用为增大混合液中悬浮粒子的体积，提高固液分离速度，同时可除去一些杂质。 凝聚剂种类： A、无机盐类：如硫酸铝、明矾、硫酸铁、硫酸亚铁、FeCl3、AlCl3、ZnCl2、硫酸镁等； B、无机碱：如Al(OH)3、Fe(OH)3、Ca(OH)2、CaO等； C、聚合无机盐，如聚合铝、聚合铁。 机理： A、破坏双电层，B、水解后胶体吸附，C、氢键结合等。 Ca2+离子浓度较高时，可采用可溶性盐，如草酸钠等 Mg2+离子的去除一般采用加入三聚磷酸钠 磷酸盐处理，也能大大降低Ca2+ 、Mg2+离子的浓度 铁离子，可加入黄血盐，使其形成普鲁士蓝沉淀而除去 色素物质的去除，一般以使用离子交换树脂、离子交换纤维、活性炭等材料的吸附法来脱色最为普遍。 例如活性炭可用于柠檬酸发酵液的脱色，盐型强碱性阴离子交换树脂可用于解朊酶和果胶酶溶液的脱色，磷酸型阴离子交换树脂被用于谷氨酸发酵液的脱色等。 一般发酵液的脱色往往是在过滤除去菌体后进行。 The first step in most industrial bioseparations is the removal of insoluble solids from the fermentation beer. The concentration and size of these insolubles varies widely. 大部分工业生物分离的第一步往往是将不溶物质从发酵液中除去。这些不溶性固体的浓度和颗粒大小的变化范围很宽。 The concentration can be as high as 60% per volume or as low as 0.1%. 浓度可高达每单位体积含60%的不溶性固体，又可低至每单位体积仅含0.1%。 The size ranges from microorganisms of perhaps 1 um diameter up to insoluble nutrients characteristically 1mm in diameter 粒径的变化可以从直径约为1um的微生物，到直径为1mm的不溶性物质。 When these insolubles are dilute, large rigid, they can be easily separated by filtration.