植物组培2.pptVIP

一、组织培养的定义： 植物组织培养(tissue culture)是指通过无菌操作，把植物体的器官、组织或细胞(即外植体)接种于人工配制的培养基上，在人工控制的环境条件下培养，使之生长、发育成植株的技术与方法。下面是它的一个简图： * * * * * * * * 植物组织培养 过程: 离体组织或细胞 植物体 脱分化 细胞分裂素≈生长素 愈伤组织 芽 根 细胞分裂素生长素 细胞分裂素生长素 再分化 植物细胞培养 不需要光 需要光 二、实验操作 （一）制备MS固体培养基 MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4。C保存配制好的培养基母液来制备 1、配置各种母液 为了避免每次配制培养基都要称量几十种成分，减少工作量，可以将各种成分按比例配置成浓缩液，即培养基母液，一般将常用药品配成比所需浓度高10－100倍的母液。使用时，根据浓缩比例计算用量，加水稀释。 ①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量 2、配置培养基 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml ① 配制培养液 配制1LMS培养基，先将称好的琼脂加800ml蒸馏水，加热使琼脂溶化，然后加入蔗糖15g，取配制好的母液，依次加入，加蒸馏水定容至1000ml ② 调PH ③培养基的分装 3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌 1、选材：茎段，取生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒 2、消毒 ①流水冲洗 植物茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉浸泡30分钟，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右 ② 酒精处理（以下操作均在超净工作台中） 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗 ③消毒液处理 取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液 （三）接种 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20分钟 1、接种室消毒 2、无菌操作要求 操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后，都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。 3、材料的切取和接种 将装有培养基的锥形瓶整齐地排列在酒精灯左侧。将消过毒的茎段在无菌培养皿中切成小段（长约0.5-1cm）。左手持锥形瓶。右手拉开捆扎锥形瓶的绳子，并将封口膜攥在右手手心，以避免封口膜接触瓶口的一面被污染。左手持瓶，使瓶口旋转通过火焰，右手用镊子夹取茎段，放入培养基中。插入时应注意不要倒插。每瓶接种6－8块外植体。接种后，将封口膜重新扎好