创伤感染细菌的分离鉴定.pptVIP

* * * * 实验三 创伤感染细菌、性传播细菌 的分离鉴定、病案讨论 一、讨论：1、临床样本中致病性球菌的分离鉴定方案 2、创伤感染细菌、性传播细菌致病物质及所致疾病 二、示教：1、创伤感染细菌的分离鉴定、性传播细菌形态与染色 2、创伤感染细菌培养物观察(菌落的颜色、溶血性等） 3、葡萄球菌血浆凝固酶试验（试管法） 三、操作：1、葡萄球菌血浆凝固酶试验（玻片法） 2、ASO 试验 3、RPR 一、讨论：1、临床样本中致病性球菌的分离鉴定方案 机械学院王斌同学皮肤表面有一化脓感染病灶，经久不愈。请设计一个方案：从脓汁标本中分离、鉴定化脓性病原菌 ，并提出防治原则 以实验小组为单位先查文献写设计性方案 上课每组派代表介绍自己小组的方案，其他组同学质疑 课堂讨论完善，写到实验报告上 生化模式转变为数学模式 自动微生物鉴定和药敏分析系统 16SrRNA序列分析 生物芯片技术 特点 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 色素 金黄色 白色 溶血素 ＋ －/＋ 血浆凝固酶 ＋ － 发酵甘露醇 ＋ － SPA ＋ － 致病性 强 条件致病 致病葡萄球菌鉴别 链球菌鉴别 菌落小、半透明 、表 面光滑、边缘整齐 G+ 、链状 完全溶血 乙型链球菌 不溶血 丙型链球菌 草绿色不完全溶血环 菊糖发酵试验 -（紫色） +（黄色） 胆汁溶菌试验 -（混浊） +（澄清） 甲型链球菌 肺炎链球菌 一、讨论：2、创伤感染细菌、性传播细菌致病性 致病物质 致病作用与所致疾病 1．毒素 1）葡萄球菌溶素 staphylolysin 毒素性疾病，损伤细胞膜 2）杀白细胞素 leukocidin 损伤粒细胞、吞噬细胞细胞膜 3）肠毒素 enterotoxin 食物中毒，假膜性肠炎 4） 表皮剥脱毒素 exfoliatin 烫伤样皮肤综合征 5） 毒性休克综合征毒素—1 TSST-1 毒性休克综合征，发热、多器官系统的功能紊乱 2．酶 1） 凝固酶 Coagulase 侵袭性疾病，抗吞噬 局限化及形成血栓 2）其他酶 透明质酸酶（扩散因子） 降解结缔组织的透明质酸 葡激酶（纤维蛋白溶酶） 水解纤维素 脂酶 分解脂肪 耐热核酸酶DNA酶 水解DNA，测定葡萄球菌有无致病性的重要指标 触酶 分解H2O2 （二）链球菌致病物质 致病作用与所致疾病 致热外毒素 Pyrogenic exotoxin, SPE 猩红热（scarlet fever） 链球菌溶素 Streptolysin SLO 辅助诊断指标 侵袭性疾病 SLS β溶血环 透明质酸酶 Hyaluronidase 扩散因子，分解细胞间质透明质酸 有利于化脓感染病灶扩散 链激酶 Streptokinase 水解纤维蛋白 链道酶 Streptodornase 酶解核酸，脓稀薄汁有利于感染扩散 M蛋白 Protein M 抗吞噬，抗吞噬细胞内杀菌作用， 超敏反应，风湿热、感染后肾小球肾炎 F蛋白 Protein F 黏附素，利于宿主内定植和繁殖 脂磷壁酸 LPA 二、示教： 1、创伤感染细菌、性传播细菌形态与染色观察 2、创伤感染细菌、性传播细菌培养物观察(菌落的颜色、溶血性等） 3、葡萄球菌血浆凝固酶试验（试管法） staphylococcus Streptococcus G+，粗大杆菌，芽孢椭圆，位于菌体次极端，无鞭毛 在体内时有明显荚膜 有A-E 5个血清型 产气荚膜杆菌的形态、染色 钩端螺旋体、梅毒螺旋体镀银染色 钩端螺旋体（暗视野显微镜） 镀银染色法（梅毒螺旋体） 梅毒螺旋体（暗视野显微镜） 镀银染色法（钩端螺旋体） 金黄色葡萄球菌 血平板上迁徙生长，β溶血 专性厌氧，生化反应不活泼，繁殖体对青霉素敏感 破伤风杆菌的培养 血平板上形成双层溶血环 在蛋黄琼脂平板上，菌落出现乳白色浑浊圈（Nagler反应） 能发酵多种糖类，产酸产气，牛乳糖培养基中汹涌发酵 产气荚膜杆菌的培养 Neisseria gonorrhoeae 0.8μm, Gram negative, diplococci (pairs of cocci) most in neutrophil cells 试管法检测： 游离血浆凝固酶 玻片法检测： 结合血浆凝固酶 三、操作： 1、葡萄球菌血浆凝固酶试验（玻片法） 2、ASO 试