微生物药品配制知识.docVIP

PAGE PAGE 1微生物药品配制生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000ml蒸馏水中，分装，121摄氏度高压灭菌20min。（国标15min）。平板计数琼脂（菌落总数）：称取23.5g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121摄氏度高压灭菌15min，冷却至46摄氏度左右备用。平板计数琼脂（嗜冷菌）：称取23.5g和1g脱脂乳粉于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121摄氏度高压灭菌15min，冷却至46摄氏度左右备用。脑心浸液琼脂：称取50g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121摄氏度20min高压灭菌后备用。临用前每250ml加入0.5ml维生素B12，B12为1mg/ml。孟加拉红琼脂：称取31.6g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121摄氏度20min高压灭菌后备用。月桂基硫酸盐胰蛋白栋：称取35.6g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121摄氏度高压灭菌15min后备用。双料LST除蒸馏水外，其他成分加倍。煌绿乳糖胆盐：称取40g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121摄氏度高压灭菌15min后备用。1mol氢氧化钠：称取40g氢氧化钠溶于1000ml蒸馏水中。1mol盐酸：移取浓盐酸90ml，用蒸馏水稀释至1000ml。LB营养琼脂：称取34g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121摄氏度15min高压灭菌后备用。营养肉汤：称取19g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，121摄氏度15min高压灭菌后备用。抗生素1号培养基：称取26g于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装，115摄氏度30min高压灭菌后备用。青霉素酶工作液（阿拉丁酶）：称取1mg用无菌生理盐水溶解，定容至100ml容量瓶中。阿拉丁酶对应阳性对照样品：吸取10ul阿拉丁酶工作液溶于100ml灭菌脱脂乳粉中。杯碟阴性对照样品：称取10g脱脂乳粉溶于90ml蒸馏水中，113摄氏度20min高压灭菌。青霉素储备液（国产）：取0.1g用磷酸盐缓冲溶液定容至10ml，即10mg/ml。青霉素工作液：吸取20ul青霉素储备液用磷酸盐缓冲溶液定容至10ml，即20ug/ml。舒巴坦储备液：取0.1g用磷酸盐缓冲溶液定容至10ml，即10mg/ml。舒巴坦工作液：取1ml舒巴坦储备液用磷酸缓冲溶液定容至10ml，即1mg/ml。微生物结果报告菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位表示（cfu）。1.1 选取菌落数在30－300cfu之间，无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30cfu的平板记录具体菌落数，大于300cfu的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 1.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。1.3 当平板上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。2.菌落总数的计算方法2.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或灭毫升）中菌落总数结果。2.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，计算每ml牛奶中微生物的个数N，用以下的公式：∑c N = （n1+0.1n2）d这里∑c： 是所有皿上菌落数的总和n1： 是第一个稀释度培养皿上的平皿数n2： 是第二个稀释度培养皿上的平皿数d： 是与第一个稀释液相对应的稀释因子结果保留两位有效数字。结果以科学计数法表示。举例：微生物计数给出以下的结果（包括两个带盖培养皿）：在第一个稀释度（10E-2）：232和244个菌落在第二个稀释度（10E-3）：33和35个菌落∑c 232+244+33+35 544N = = = =24727（n1+0.1n2）d [2+（0.1*2）]*10-2 0.022上述数据经“四舍五入”后，表示为25000，结果为2.5×104cfu/ml。注：如果有两个以上可以计数的稀释度，公式应修改为用多个稀释度进行计算。如为三个稀释度，由下面的公式可计算出每毫升中微生物的数量。∑cN = （n1+0.1n2+0.01n3）d2.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。2.4 若所有稀释度的