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α-淀粉酶的发酵、提取和活性测定 背景知识 淀粉酶是水解淀粉和糖原酶类的总称，广泛存在于动植物和微生物中。α-淀粉酶作用于淀粉时，可从分子内部切开α-1，4键而生成糊精和还原糖。产物的末端葡萄糖残基C1碳原子为α-构型，故称α-淀粉酶。如枯草杆菌BF7658 α-淀粉酶，广泛应用于食品、酿造、制药、纺织以至石油开采等许多方面。 一、实验目的 通过以α-淀粉酶的发酵生产为实例，学习和掌握酶的液体发酵和盐析沉淀法提取纯化的基本原理和过程，掌握α-淀粉酶分析方法、发酵和提取的评价标准。 二、实验原理 1、工业生产中酶的提取多数采用盐析沉淀法，即：通过加入不同的金属盐破坏酶的水化层同时中和酶的表面电荷，而使酶快速的形成沉淀，得到分离纯化。本实验通过向枯草杆菌发酵液中加入适量的硫酸铵，对发酵液中的胞外α-淀粉酶进行纯化提取。 2. 在碱性溶液(NaOH)中，双缩脲(H2NOC—NH—CONH2)能与Cu2+作用，形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键（－CO－NH－），因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应。 此络合物在540nm吸收值在一定范围内与蛋白质的质量成正比. 3. 淀粉在碘液中会呈现紫色。α-淀粉酶作用于淀粉时，可从分子内部切开α-1，4键而生成糊精和还原糖。而糊精和还原糖在碘液中不显色，故可通过预先盛有淀