荧光酶免疫分析法_ppt课件.pptVIP

④、HPPA荧光底物（4a） ：3—P—羟基苯丙酸溶于Tris缓冲液(pH7.8)中，加0.2％的KathonCGe作为防腐剂； 试剂 ⑤、H2O2溶液（4b） ：柠檬酸—醋酸缓冲液，pH6.0，含过氧化氢。避免与氧化／还原剂接触； 试剂 ⑥、终止液： 甘氨酸缓冲液（5） ，pH10.3； 试剂 ⑦、洗涤液（6） ：含有吐温20的磷酸盐缓冲液，加入0.05％Broni—dox作为防腐剂。按1:9比例加入蒸馏水稀释。由于储于4℃可能形成结晶，稀释前温度需达18—30℃； 试剂 ⑧、hTSH标准品（7） ：TSH存在于干血滤纸片的血斑中，包括一个零空白。存于装有干燥剂的铝箔袋中。加入0.05％Bronidox作为防腐剂。标准品由红细胞压积为50％一55％的人血液制得，所含的hTSH浓度经过WHO2nd IRP(80／558)校正； 试剂 ⑨、质控物（8） ：hTSH存在于滤纸上的干血滤纸血斑中。加入0．05％Bronidox作为防腐剂。1张滤纸中具有5套2种浓度质控物(品)，存于装有干燥剂的铝箔袋中。 标准品和质控物(品)的TSH浓度有批号差异，需参照每一试剂盒中的标准品和质控物(品)的记录单。 试剂 全血样品中TSH含量与血清样品中TSH含量的转化公式 TSHmIU／L血清＝TSHmIU／L全血×lOO／(100—HCR) 试剂盒内的TSH标准品和质控物的浓度 标准血片 TSH浓度（mIU/L） 质控物 TSH浓度（mIU/L） A 1.0 C1 2 B 7.5 C2 20 C 15.0 D 40 E 60 F 100 3、实验操作 实验操作步骤 (1)用编码机给每一张血片按次序盖上卡片号，此卡片号也就是我们的检验编号。 在检验前，所有的试剂和酶标反应板应放置室温平衡30分钟。 考评项目赋标准分，对照考评内容和考评办法对考评项目进行考评，评出各考评项目的考评实际得分，考评类目下各考评项目考评实际得分之和为该考评类目的考评实际得分 TSH荧光酶免疫检测法 佛山市新生儿疾病筛查中心 刘海平 一、先天性甲低的新生儿筛查方法 1、酶免疫分析法 (enzymelmmunoassay，EIA) 2、放射免疫分析法 (radioimmunoassay，RIA) 3、免疫放射法 (immunoradiometricassay，IRMA)  一、先天性甲低的新生儿筛查方法 4、时间分辨荧光免疫分析法 TRFIA me-resolvedfluorescenceimmunoas—say 5、荧光酶免疫分析法FEIA fluoreseenceenzymeimmunoassay 6、自动新生儿疾病筛查系统(automatednewbornscreeningsystem) TSH荧光酶免疫分析法 FEIA Fluorescence enzyme immunoassay 1、原 理 1．原理 荧光酶免疫分析法(FEIA)是一种高度灵敏的检测方法，用FEIA测定血hTSH基于一步夹心法原理，采用固相、双位点荧光酶免疫分析法。 干血斑中洗涤出的hTSH，同时与包被在酶标板上抗hTSH的单克隆抗体分子和辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗hTSH—亚基的第二抗体结合。 被测TSH抗原 被测TSH抗原有两个抗原决定簇 故叫双位点 β位点 α位点 TSH单克隆抗体 TSH单克隆抗体 TSH单克隆抗体 包被在反应板上的 TSH单克隆抗体 故叫固相 HPR标记的抗TSH 亚基单克隆抗体 HRP 辣根过氧化物酶(HRP)标记的 抗hTSH—亚基（ β位点）的第二抗体 TSH单克隆抗体 被测TSH抗原 TSH单克隆抗体 TSH单克隆抗体 被测TSH抗原 被测TSH抗原 HPR标记的抗TSH 亚基单克隆抗体 HPR标记的抗TSH 亚基单克隆抗体 HPR标记的抗TSH 亚基单克隆抗体 HPR标记的抗TSH 亚基单克隆抗体 HRP 被测TSH抗原 被测TSH抗原 HRP HRP HRP 打入血斑（TSH）并加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗hTSH—亚基的第二抗体溶液于已包被TSH单克隆抗体的酶标反应孔内。（一步法） PH：6.5 TSH单克隆抗体 被测TSH抗原 TSH单克隆抗体 TSH单克隆抗体 被测TSH抗原 被测TSH抗原 HPR标记的抗TSH 亚基单克隆抗体 HPR标记的抗TSH 亚基单克隆抗体 HPR标记的抗TSH 亚基单克隆抗体 HPR标记的抗TSH 亚基单克隆抗体 HRP 被测TSH抗原 被测TSH抗原 HRP HRP HRP HPR标记的抗TSH 亚基单克隆抗体 HPR标记的抗TSH