乳糖操纵元的正调控.PPTVIP

正调控：是经诱导物诱导转录的调控机制，即诱导物与另一蛋白质结合形成一种激活子复合物，与基因启动子DNA序列结合，激活基因起始转录 负调控：阻遏物阻止转录过程的调控，即阻遏物与DNA分子结合，阻碍RNA聚合酶转录，使基因处于关闭状态。只有当阻遏物被除去之后，转录才能起动，产生mRNA分子 原核生物中基因表达以负调控为主。真核生物中则主要是正调控机制。 图 8－8 转录水平的负调控与正调控 2、乳糖操纵元 大肠杆菌的乳糖降解代谢途径： Monod等发现,当大肠杆菌生长在含有乳糖的培养基上时,乳糖代谢酶浓度急剧增加;当培养基中没有乳糖时,乳糖代谢基因不表达,乳糖代谢酶合成停止。 为此，Jacob和Monod（1961）提出了乳糖操纵元模型，用来阐述乳糖代谢中基因表达的调控机制 ｚ、ｙ、ｏ代表三种酶的结构基因 ｚ是β-半乳糖苷酶基因;ｙ是渗透酶基因;a是转乙酰酶基因;o是开关位点，为操纵基因; P是调节基因，起控制结构基因的转录和翻译的作用。 由调节基因编码的产物是一种组蛋白，称为阻遏物。 当培养基内没有乳糖时，阻遏物接在操纵基因上，关闭了它所控制的操纵子，以阻止核糖核酸聚合酶的通过，使结构基因处于抑制状态，从而阻止了三种酶基因的转录和翻译。 当培养基内加入乳糖后，细菌开始分解乳糖，分解的产物半乳糖便成为反阻遏的诱导物。诱导物与阻遏物结合，把阻遏物从操纵基因上拿下来，打开了操纵子的开关，开放了核糖核酸聚合酶的通道，使结构基因活化，使三种酶基因进行转录和翻译，导致三种酶量剧增。 图 8－9 乳糖操纵元模型及对有无乳糖的反应 两种组成型突变： I→I—，O→Oc, 在有无诱导物时均可大量组成型表达 乳糖操纵元模型 乳糖操纵元的负调控 乳糖操纵元的正调控 除了阻遏蛋白能抑制lac操纵元转录外，其它因子也能有效地抑制lac mRNA转录，这个因子的活性与葡萄糖有关： →葡萄糖抑制腺苷酸环化酶的活性 →腺苷酸环化酶催化ATP前体→cAmp →cAmp+代谢激活蛋白(CAP)→ cAmp-CAP复合物，作为操纵元的 正调控因子 →当cAmp-CAP复合物的二聚体插入到lac启动子区域特异核苷酸序列时，使启动子DNA弯曲形成新的构型，RNA聚合酶与这种 DNA 新构型的结合更加牢固，因而转录效率更高。 →在有葡萄糖存在时，不能形成cAmp，也就没有操纵元的正调控因子cAmp-CAP复合物，因此基因不表达。 乳糖操纵元的正调控 目前，通过遗传分析证明lac操纵元的存在；已经分离出阻遏蛋白，并成功地测定了阻遏蛋白的结晶结构，以及阻遏蛋白与诱导物及操纵子序列结合的结构 图 8－14 乳糖操纵元的不同调控位点 a：CAP结合位点；b：RNA聚合酶结合位点；R：形成抑制环的区域，下面的数字表示转录起始点上下游的碱基数 3、色氨酸操纵元 大肠杆菌色氨酸操纵元是合成代谢途径中基因调控的典型例子： 色氨酸操纵元包括色氨酸合成中5种酶的结构基因。当培养基中有色氨酸时，色氨酸操纵元5种酶的转录同时受到抑制；在色氨酸供应不足时，发生转录。 色氨酸直接作为阻遏物而不是诱导物参与调控色氨酸mRNA的转录。因此trp操纵元是一个典型的可阻遏操纵元 图 8－15 色氨酸操纵元的组成 1）阻遏物trp R由相距较远的阻遏物基因编码→无辅基阻遏物 + trp→活性无辅基阻遏物—色氨酸复合物，与操纵子结合，阻止转录 2）色氨酸不足时，无辅基阻遏物的三维空间结构发生改变，不能与操纵子结合，进行转录 活性的阻遏物与操纵子结合并不足以抑制转录的起始。（弱化子） 3）弱化作用：在高浓度色氨酸存在时，转录的前导序列mRNA只含有140个核苷酸，其中有一段28bp的弱化子区域，它在转录后可迅速形成发夹环结构，RNA聚合酶转录时不能通过这种发夹环结构。所以弱化子是一种内部终止子。 4）无色氨酸时，由于前导肽中色氨酸密码子的作用，使弱化子不能形成发夹结构而成为单链。RNA聚合酶则通过弱化子，继续向前转录结构基因。 图 8－16 色氨酸前导序列经碱基配对形成几种二级结构 4、阿拉伯糖操纵元 阿拉伯糖操纵元也是解释代谢途径的调控系统，它具有一些与lac操纵元相似的特点，但与前述两种操纵元系统的显著区别是它的同一种调控蛋白--Ara C调控蛋白既可起正调控,也可起负调控作用 A、阿拉伯糖操纵元的组成。R：调控基因araC编码AraC蛋白；O：操纵子位点；I：诱导位点，具有CAP结合位点。 B、有ara时，AraC与I位点结合，CAP-cAmp与CAP位点结合，诱导表达结构基因，为正调控。 C、无ara时，没有CAP-cAmp复合体与CAP位点结合，AraC二聚体(D)与I及O2同时结合，形成抑制环