生物药物分析与检验_第三章 免疫分析法ppt课件.ppt

第三章 免疫分析法 ;一、概述 二、抗原 三、抗体与免疫反应 四、免疫分析方法及应用 五、免疫扩散法;一、概述 二、抗原 三、抗体与免疫反应 四、免疫分析方法及应用 五、免疫扩散法; 免疫学是研究免疫系统的结构与功能，了解其在免疫应答反应中对机体有益的防卫功能和有害的病理损伤的机制，研究有效的免疫措施，实现以防病，治病为目的的一门现代医学学科。; 什么叫免疫分析？ 基于抗原和抗体的特异性反应进行检测的一种技术手段。抗原抗体反应是指抗原与相应的抗体之间发生的特异性结合反应。它既可以发生在体内，也可以发生在体外。高选择性和低检出限。 在体内发生的抗原抗体反应为体液免疫应答的效应作用。体外的抗原抗体结合反应主要用于抗原或抗体的检测，用于免疫学诊断。;(1) 在实验药物动力学和临床药物学中，测定生物利用度和药物代谢动力学参数等生物药剂学中的重要数据，以便了解药物在体内的吸收、分解、代谢和排泄情况； (2) 在药物的临床检测中，对治疗指数小、超过安全剂量易发生严重不良反应或最佳治疗浓度和毒性反应浓度有交叉的药物血液浓度进行监测； (3) 在药物生产中，从发酵液或细胞培养液中快速测定有效组分的含量，以实现对生产过程的在线监测； (4) 对药品中是否存在特定的微量有害杂质进行评价。;免疫分析： 利用抗原与抗体的特异性结合作用，来选择性识别和测定，可以作为抗体或抗原的待测物. 免疫分析方法 ;;;特异性;;;一、概述 二、抗原 三、抗体与免疫反应 四、免疫分析方法及应用 五、免疫扩散法;抗原（antigen,Ag)：是一类能刺激机体免疫系统发生免疫应答，并能与相应免疫应答产物（抗体和致敏淋巴细胞)在体内外发生特异性结合的物质 抗原的两种特性：免疫原性和抗原性（免疫反应性） 免疫原性（immunogenicity),能刺激机体发生免疫应答，产生抗体和致敏淋巴细胞的能力。 免疫反应性能与相应抗体或致敏淋巴细胞发生特异性结合的能力。 凡具有免疫原性和抗原性的物质称为完全抗原 只有抗原性而不具有免疫原性的物质称为半抗原 半抗原+蛋白质——完全抗原 赋予半抗原以免疫原性的蛋白质称为载体。 ;1.抗原的免疫原性;一、异物性;二、一定的理化性状;三、完整性;四、宿主遗传性;2.抗原的特异性;一、抗原决定簇;4、大小 抗原决定簇的大小与相应抗体的抗原结合部位相当。 一个蛋白质抗原决定簇含5-7个氨基酸残基 一个多糖抗原决定簇含5-7个单糖 一个核酸半抗原决定簇含6-8个核苷酸 5、抗原结合价（antigenic valence)是指能和抗体分子结合的抗原决定簇的总数。 半抗原为一价 天然抗原的分子结构复杂，分子表面有多个决定簇为多价 ; 构象决定簇：序列上不相连而依赖于蛋白 质或多糖的空间构象形成的决定簇，多暴 露于分子表面。 顺序决定簇：一段相连的氨基酸序列所形 成的决定簇，多位于抗原分子内部。 功能性AD：分子表面，易被识别。 隐蔽性AD：分子内部。 B细胞决定簇：分子表面。 T细胞决定簇：分子内部。 ;三、共同抗原和交叉反应;2.2 药物分子的抗原性;3、药物分析中，为了得到高效价的抗血清，通常会与蛋白质载体合成人工抗原进行试验。 常用载体：牛血清白蛋白（BSA）、卵清白蛋白（OA）、破伤风类毒素（TT）、钥孔蛋白（KLH）等。;（1）半抗原和载体结合的化学反应;在选择结合半抗原的化学反应时，应考虑不同的连接方式可能对抗体的专一性产生不同的影响。 半抗原没有可以结合的官能团时需要合成适当的衍生物。 为得到特定抗原决定簇相对单纯的合成抗原，需要根据半抗原的化学特性及连接产物的化学特性选择连接的半抗原。 ;（2）半抗原和载体的选择原则;载体选择原则： 应考虑载体对检测系统的影响：选择的载体应和检测体系不发生交叉反应；用于包被合成抗原的载体和用于免疫动物产生抗体的合成抗原的载体蛋白不同。 免疫过程中考虑载体效应的影响：抗体的特异性依赖于半抗原分子结构中的免疫决定区，但整个载体蛋白大分子对于抗体反应的性质和量也有影响；应使用相同载体的合成抗原制备半抗原抗体。;（3）合成抗原的测定;;一、概述 二、抗原 三、抗体与免疫反应 四、免疫分析方法及应用 五、免疫扩散法; 免疫分析实际上是一种特殊的试剂分析， 特点是抗体成为分析试剂。 ;1、抗体的结构与功能;抗体（antibody，Ab）：是由抗原进入机体刺激B细胞分化增殖为浆细胞而合成并分泌的一类能与相应抗原发生特异性结合并产生免疫效应的含有糖基的球蛋白。抗体分布于体液（血液、淋巴液、组织液及粘膜的外分泌液）中，主要存在于血清内。 ;1. 抗体（antibody, Ab）功能性概念