Q_HDYIN0001-2017-2017饲用葡萄糖氧化酶活力的测定分光光度法.pdf

Q/HD 北京益农饲料中心企业标准 Q/HDYIN0001－2017 饲用葡萄糖氧化酶活力的测定 分光光度法 Determination offeedglucoseoxidaseactivity Spectrophotometricmethod 2017－1－3发布 2017－1－4实施 北京益农饲料 中心 发布 Q/HDYIN0001－2017 前 言 本标准是根据GB/T1.1-2009 《标准化工作导则 第 1部分：标准的结构和编写规则》的条文制定 的，在标准内容要求、标准格式编写规则上执行了上述标准。 本标准由北京益农饲料中心提出。 本标准起草单位：北京益农饲料中心。 本标准主要起草人：崔捷、王家辉、翟鹏 。 本标准于2017年1月4 日首次发布实施。 1 Q/HDYIN0001－2017 葡萄糖氧化酶活力测定 （分光度法） A.1.原理 A.1.1 葡萄糖氧化酶的催化特性：葡萄糖氧化酶的每个酶分子中含有两单位FAD （黄素腺嘌呤二核苷 酸），作为受氢体催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生过氧化氢。 CH O+O 葡萄糖氧化酶 CH O+HO 6 12 6 2 6 12 6 2 2 在一定时间内葡萄糖经氧化酶催化发生反应后，测定其反应液的过氧化氢浓度即可算出葡萄糖氧化酶 的活力。 A.1.2 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化产生的过氧化氢在一定pH值的缓冲溶液中和加热条件下能使靛蓝 胭脂红发生褪色反应，并且其反应速度在一定范围内和过氧化氢浓度成正比，据此测定出产生的过氧化 氢的量，进而计算出葡萄糖氧化酶活力。 A.1.3 首先利用一系列浓度的过氧化氢标准溶液与靛蓝胭脂红反应，在615nm波长处测定吸光度，建 立标准曲线。然后，作葡萄糖氧化酶催化葡萄糖反应，再取其反应液与一定浓度的靛蓝胭脂红溶液反应 随后测定其在615nm波长处测定吸光度，将吸光度值代入标准曲线方程后可推算出氧化酶活力。 A.2药品 A.2.1 0.2mol/L葡萄糖溶液:称取3.96g一水葡萄糖定容于100.00mL冷藏3小时备用，2天内有效。 -3 A.2.2 1．0×10 mol/L靛蓝胭脂红溶液：称取0.466g靛蓝胭脂红定容于1000mL。 A.2.3 醋酸-醋酸钠缓冲溶液(pH 5.2)：称取16.16g三水醋酸钠及2.48g冰醋酸定容至1000mL A.2.4 12mg/L过氧化氢标准溶液：准确称取0.040g 30%的过氧化氢溶液 （过氧化氢需事先标定取实际 值）定容于1000mL。 A.3实验方法 A.3.1标准曲线的绘制 准确吸取0、1、2、3、4、5、6mL过氧化氢标准溶液(12mg/L)，分别置于25mL 比色管中，加人1.3mL -3 靛蓝胭脂红溶液(1．0×10 mol/L)和3．0mL 乙酸一乙酸钠缓冲液，再加人蒸馏水稀释至25mL配成含有 过氧化氢0.00mg/L、0.48mg/L、0.96 mg/L、1.44 mg/L、1.92 mg/L、2.40 mg/L、2.88 mg/L 的溶液， 于沸水浴中加热13min后，用流水冷却比色管5min。 用1cm 比色皿，以蒸馏水作参比，在波长615nm处测定其吸光度，以吸光度对过氧化氢浓度作图 （分 光度作横坐标，过氧化氢浓