共聚焦激光扫描荧光显微镜_ 生化经典ppt课件.pptVIP

共聚焦激光扫描荧光显微镜 ; 什么是共聚焦激光扫描荧光显微镜？ 共聚焦激光扫描荧光显微镜（Confocal Laser Scanning Fluorescence Microscope；LSFM） ? 以激光作为激发光源，采用光源针孔与检测针孔共轭聚焦技术，对样本进行断层扫描，以获得高分辨率光学切片的荧光显微镜系统;荧光和荧光显微镜;二、荧光显微镜术的基本原理;共聚焦激光扫描荧光显微镜基本配置;;光电倍增管;;三维胶原基质培养的血管平滑肌细胞;共聚焦激光扫描荧光显微镜应用领域;Intensity;2. 荧光能量共振转移 (Fluorescence Resonance Energy Transfer) ;FITC/TRITC, Cy3/Cy5, BFP/GFP;3. 绿色荧光蛋白（GFP） GFP的发现：60年代，Shimomura等首先从水母中分离出一种水母发光蛋白 (aequoren)，该蛋白与钙和肠腔素结合后可产生蓝色荧光。然而水母整体提取的颗粒都呈绿色，后经证实在水母体内还存在另外一种发光蛋白即绿色荧光蛋白（ green fluorescent protein GFP）。; 原理: 检测游离Ca2+变化的荧光探针多为Ca2+螯合剂，通常不能透过细 胞膜，只有与乙酰甲酯(AM)相连方可进入细胞内, 被细胞内酯酶水解后方能与胞内游离钙结合后发出荧光。 Kd值：为Ca2+解离常数，指示检测Ca2+浓度的范围: 0.1xKd-10xkd —和很多因素有关（pH、 Mg2+、温度、与蛋白的结合、等） 细胞内生理Ca2+浓度值：10-100nM 细胞内Ca2+超载浓度值：基础Ca2+浓度的10倍左右 ;KCL诱导的细胞外Ca++内流测量;双光子激光扫描荧光显微系统;共聚焦激光扫描荧光显微镜术样本制备的基本原则;2. 荧光探针的选择;3. 3-D样本制备的基本原则;三维胶原基质培养的血管平滑肌细胞