血清总胆固醇的测定9.pptVIP

一、目的 了解胆固醇的测定方法 掌握胆固醇测定临床意义 二、原理 胆固醇酯加水在胆固醇酯酶的作用下生成游离胆固醇和脂肪酸。游离胆固醇加氧在胆固醇氧化酶的作用下生成胆脘-4-烯-3-酮和过氧化氢，过氧化氢再加4-氨基氨替比林和酚在过氧化物酶的作用下生成红色的苯醌亚胺。其反应如下： 三、试剂 宁波慈城生化试剂厂生产的胆固醇测定试剂盒中包括： 缓冲液二瓶：90ml×2 酶溶液一瓶：10ml×2 工作液：临用时按需要量将试剂1和2按9：1的比例混匀即成，其他工作液置4℃冰箱一周内稳定。 标准胆固醇液一支：1ml，浓度为4.09 m mol /L (100mg/dl)。 四、器材 试管、微量加样器、 恒温水浴箱、分光光度计等。 五、操作 取试管3支，编号，按下表依次操作： 六、计算 胆固醇浓度（mmol/L）= A测/A标×C标 C标为4.09mmol/L 参考范围： 正常人静脉空腹血清胆固醇浓度为2.6—6.5mmol/L 七、注意事项 1．测定标本要求空腹抽血。 2. 酶法测定胆固醇的前二步反应特异性高，而指示反应（第三步反应）特异性则较差，干扰反应往往发生在指示反应。溶血标本、黄疸标本及高血脂标本均不影响测定结果，但血液中一些还原性物质，如维生素C、谷胱甘肽及左旋多巴可与色原性氧受体竞争H2O2，使结果出现偏差。 3．胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全，造成结果偏低。 八、思考题 本次测定的血清样本Ch值是否正常？ 血清胆固醇浓度异常见于哪些临床疾病？ * 胆固醇的测定法的试剂中，除上述3种酶、酚和4-氨基氨替比林外，还有维持PH恒定的缓冲剂、胆酸钠、表面活性剂以及稳定剂等。 胆酸钠是为了提高胆固醇酯酶的活性，表面活性剂的作用是促进胆固醇从脂蛋白中释放出来。 * * * 胆固醇的测定法的试剂中，除上述3种酶、酚和4-氨基氨替比林外，还有维持PH恒定的缓冲剂、胆酸钠、表面活性剂以及稳定剂等。 胆酸钠是为了提高胆固醇酯酶的活性，表面活性剂的作用是促进胆固醇从脂蛋白中释放出来。