芡实对糖尿病肾病大鼠肾脏组织mmp-9 timp-1及collagenⅳ表达的影响-effect of gordon euryale seed on mmp - 9 timp - 1 and collagen ⅳ expression in kidney tissue of diabetic nephropathy rats.docxVIP

芡实对糖尿病肾病大鼠肾脏组织MMP-9、TIMP-1及CollagenⅣ表达的影响摘要目的：探索芡实对DN大鼠肾脏中MMP-9、TIMP-1及CollagenⅣ表达的影响。方法：将65只健康雄性Wistar大鼠，随机取10只选为正常组（N组）；余55只大鼠利用一次性腹腔里注入链脲佐菌素（STZ35mg/kg）制造DN模型，模型制造成功后，随机分成DN组、芡实低剂量组（EL1.5g·kg-1·d-1）、中剂量组（EM3.0g·kg-1·d-1）、高剂量组（EH6.0g·kg-1·d-1）及氯沙坦钾组（LP30mg·kg-1·d-1），各组11只，分别予以不同剂量的芡实以及氯沙坦钾药物，N组及DN组予以等体积的蒸馏水，使用灌胃途径给药。12周后，化验大鼠血糖、24小时尿蛋白定量、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿白蛋白之排泄率（UAER）、尿蛋白/肌酐（Up/Ucr）；HE、Masson、PAS染色予以观察各组大鼠的肾脏病理改变；免疫组织化学法测定各组大鼠肾组织MMP-9、TIMP-1及CollagenⅣ表达情况；运用实时荧光定量PCR（Real-timePCR）技术检测肾组织中MMP-9、TIMP-1及CollagenⅣ基因mRNA的表达。结果：1.生化指标结果：药物处理12周末，与N组比较，DN组血糖、24h尿蛋白定量、Scr、BUN、UAER、Up/Ucr显著升高（p＜0.05）；与DN组比较，EL组24h尿蛋白定量、Scr、BUN、UAER、Up/Ucr无明显减低（p＞0.05）；EM组、EH组及LP组24h尿蛋白定量、Scr、BUN、UAER、Up/Ucr明显下降（p＜0.05），但仍高于N组；EM组、EH组及LP组各组间相比较，无统计学差异（p＞0.05）。与DN组相比，EL组、EM组、EH组及LP组血糖均未见显著的变化。2.病理改变：与N组比较，DN组大鼠显示肾小球的体积增大，系膜细胞增殖，细胞外基质（ECM）增加，基底膜增宽，部分肾小管出现萎缩及间质中纤维组织增加；与DN组比较，EL组减轻不显著；EM组、EH组及LP组上述的病理变化明显减轻。3.免疫组化结果显示：（1）在各组大鼠肾组织MMP-9表达：N组大鼠肾小球的系膜区以及肾小管均可见棕黄色颗粒物质，以肾小管为著。与N组比较，DN组大鼠中肾组织MMP-9表达显著减少（p＜0.05）；与DN组比较，EL组MMP-9表达增加不明显，无统计学差异（p＞0.05）；与DN组比较，EM组、EH组及LP组MMP-9表达显著增加（p＜0.05）；EM组、EH组及LP组各组之间的比较，无统计学意义（p＞0.05）；（2）在各组大鼠肾组织TIMP-1表达：N组大鼠在肾小管可见棕黄色颗粒，而肾小球的系膜区有散在棕黄色颗粒物质；与N组相比，DN组大鼠中肾组织TIMP-1表达明显增加（p＜0.05）；与DN组比较，EL组TIMP-1表达减低不明显，无统计学差异（p＞0.05）；与DN组比较，EM组、EH组及LP组TIMP-1的表达显著减少（p＜0.05）；EM组、EH组及LP组各组之间的比较，无统计学意义（p＞0.05）；（3）在各组大鼠肾组织CollagenⅣ表达：N组大鼠的肾小球基底膜（GBM）以及肾小管的基底膜均有棕黄色颗粒物质；与N组比较，DN组肾脏中CollagenⅣ表达增加明显（p＜0.05）；与DN组比较，EL组CollagenⅣ表达减少不明显，无统计学差异（p＞0.05）；与DN组比较，EM组、EH组及LP组CollagenⅣ的表达显著减少（p＜0.05）；EM组、EH组及LP组各组之间的比较，无统计学差异（p＞0.05）。4.Real-timePCR结果：与N组比较，DN组MMP-9mRNA表达显著下降（p＜0.05），TIMP-1及CollagenⅣmRNA表达显著增加（p＜0.05），MMP-9与TIMP-1mRNA比值显著下调（p＜0.05）；与DN组比较，EL组MMP-9、TIMP-1以及CollagenⅣmRNA表达未见明显变化，无统计学差异（p＞0.05）；与DN组比较，EM组、EH组及LP组MMP-9mRNA表达显著增加（p＜0.05），TIMP-1及CollagenⅣmRNA表达显著下降（p＜0.05），MMP-9与TIMP-1mRNA比值显著上调（p＜0.05）；EM组、EH组及LP组各组之间的比较，无统计学差异（p＞0.05）。结论：芡实可能通过调节DN大鼠肾脏MMP-9、TIMP-1的表达，促进CollagenⅣ的降解，减少了ECM的堆积，进而减轻肾小球的硬化，减少了尿蛋白，保护肾脏功能，延缓DN病变的进展。关键词：芡实；糖尿病肾病；基质金属蛋白酶-9；组织金属蛋白酶抑制剂-1；CollagenⅣEffectofEuryaleFeroxonth