葡萄糖浓度波动对兔视网膜müller细胞的作用及可能机制-effect and possible mechanism of glucose concentration fluctuation on rabbit retinal m ü ller cells.docxVIP

万方数据 万方数据 硕士研究生学位论文 目 录 中文摘要………………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………………3 前言……………………………………………………………………………………5 实验一 兔视网膜Müller细胞的培养及鉴别…………………………..……………7 材料与方法…………………………………………………….……………7 结果…………………………………………………………………………11 讨论…………………………………………………………………………12 结论…………………………………………………………………………14 实验二 葡萄糖浓度波动对兔视网膜Müller细胞的影响…………………………15 材料与方法…………………………………………………………………15 结果…………………………………………………………………………17 讨论…………………………………………………………………………19 结论…………………………………………………………………………22 全文小 结……………………………………………………………………………23 参 考 文 献 ……………………………………………………………………………24 致谢 …………………………………………………………………………………29 附图 …………………………………………………………………………………30 综 述一………………………………………………………………………………40 综 述二………………………………………………………………………………47 2 硕士研究生学位论文 硕士研究生学位论文 葡萄糖浓度波动对兔视网膜 Müller 细胞的 作用及机制 中 文 摘 要 目的 ：体外培养兔视网膜 Müller 细胞，模拟糖尿病患者体内血糖急性波 动状态，观察葡萄糖的稳定性对兔视网膜 Müller 细胞生长活性及 iNOS 表达 的影响，并探讨血糖波动在糖尿病视网膜病变中的作用及其可能机制，为糖 尿病视网膜病变的治疗及预防提供理论依据。 方法：使用酶消化法培养兔视网膜 Müller 细胞；通过电镜、荧光免疫技 术进行细胞鉴定和纯度评估。取生长状态良好的第二代细胞用于实验，实验 分为 5 组 ：正常对照组（ glucose 5.5mmo l/L）；高浓度葡萄糖 持续组（ glucose 30mmo l/L）； 葡萄糖浓度波动组（ glucose 5.5/30mmol/ L， 日间高糖 3h， 低糖 2h，波 动 3 次，高糖过夜）；渗 透压对照组 1（（ glucose 5.5 mmol/ L + 甘露醇 24.5mmo l/L）持 续培养）；渗透压对照组 （2 日间（ glucose 5.5 mmol/ L + 甘露醇 24.5mmo l/L）3h，低糖 2h，波动 3 次 ，（ glucose 5.5 mmol/ L + 甘 露醇 24.5mmol/L） 过夜 ）。用 MTT 法测定 Müller 细胞生长活性的变化。采 用荧光免疫技术对 Müller 细胞胞内的诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iN O S）进行荧光标记，通过图像分析软件测定平均光密度值， 观察 Müller 细胞内 iN O S 的表达变化。 结果：（一）使用酶消化法培养兔视网膜Müller细胞，培养2-3d，培养瓶 底即可见有部分贴壁细胞，细胞透明，呈圆形或略呈梭形，可见部分突起；约 16d，细胞铺满整个瓶底，形态较均一，呈不规则形，可见细胞突起；电镜下 可见Müller细胞胞浆内含有丰富的8~10 nm微丝及各种细胞器；荧光免疫标记 见兔视网膜Müller 细胞胞内视黄醛结合蛋白（cellular retinaldehyde binding protein,CRALBP）、谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase,GS）呈绿色和红色 荧光标记，二者阳性率均95%以上；（二）葡萄糖浓度波动组（5.5/30mmol/ L） 与 高 浓 度葡萄糖 持续组（30mmol/L） 作 用 于兔视网膜Müller细胞3d后，与 正常对照组及渗透压对照组 1、2相比较，葡萄糖浓度波动组与高浓度葡萄糖 1 持续组细胞生 长活性下降（p0.01）， iNO S表达升高（p0.01）；且 葡萄糖 浓度波动组与 高 浓 度葡萄糖 持续组比较，葡萄糖浓度波动组细胞生长活性 显著下降（ p0.01），iN OS表达升高（ p0.05），均 有统计学意义；渗透压 对照组 1、2与正常对照组相比，细胞生长活性及 iNO S表达差异无统计学意 义 （ p＞ 0.05）。 结论