重组门冬酰胺酶制备表达纯化幻灯片.pptVIP

酶类药物--重组门冬酰胺酶Ⅱ表达和制备 门冬酰胺酶Ⅱ L?-天门冬酰胺酶 AnsB?能催化天门冬酰胺水解生成天冬氨酸和氨。淋巴瘤和白血病细胞通常不能合成天门冬酸胺，L?-天门冬酸胺酶将阻止癌细胞蛋白质合成而导致癌细胞死亡。在临床上，L?-天门冬酰胺酶已广泛用于治疗白血病和淋巴瘤。但目前国内尚不能生产，国外也仅有低产酶能力的大肠杆菌野生株产品，生产成本高，药价昂贵。基因工程菌产品既能填补国内空白，又能大幅度降低生产成本。 参考文献 1重组与表达 刘景晶，李晶，吴梧桐，胡梅清.《大肠杆菌L-天门冬酰胺酶Ⅱ基因的高效表达 》中国药科大学生物化学教研室, 南京210009南京铁道医学院生物化学教研室, 南京210009 2提取与纯化 刘景晶,金健勤,戴海滨,吴梧桐.《大肠杆菌L门冬酸胺酶的提取和纯化》中国药科大学生化教研室, 南京210009 重组与表达 材料 限制酶 Ncol?、Hind?III及T 4 DNA?连接酶，购自 Promega?公司；Taq?酶、dNTP?、IPTG?购自华美公司；丙烯酰胺、N , N’?-甲叉双丙烯酰胺、SDS购自sigma?公司。pKK 233?-2?购自clonetech?公司；pKK 233?- ansB?是将代PCR?扩增得到的AnsB?基因DNA?用 Ncol ?和Hind?III消化后，定向插入pKK 233?-2?的