人参皂苷rg1联合5-氟尿嘧啶对人胰腺癌细胞pc-3体外增殖的影响-effects of ginsenoside rg1 combined with 5 - fluorouracil on proliferation of human pancreatic cancer cell line pc - 3 in vitro.docxVIP

人参皂苷Rg1联合5-氟尿嘧啶对人胰腺癌细胞PC-3体外增殖的影响专业名称：外科学（普外科学）研究生：张鹏导师：潘耀振教授摘要：目的人参经现代医学化学分析和研究表明，人参的主要药用活性成分就是人参皂苷和人参多糖，人参皂苷Rg1是人参皂苷的主要成份之一，本实验探讨不同浓度的人参皂苷Rg1、5-Fu单独和联合应用对人胰腺癌细胞PC-3体外增殖的作用，以及对细胞周期和凋亡的影响，从而来寻求传统中药与西药联合应用对肿瘤治疗的新途径。方法采用四唑盐比色实验（MTT）观察不同浓度的人参皂苷Rg1、5-Fu单独和联合应用对人胰腺癌细胞PC-3体外增殖的抑制作用；应用两药相互作用指数（CDI）进行联合用药分析；流式细胞仪（FCM）检测分析细胞周期和凋亡率。结果人参皂苷Rg1、5-Fu各自单用均呈剂量依赖性抑制人胰腺癌细胞PC-3体外增殖，药物作用48h后抑制50%细胞增殖的药物浓度（IC50）Rg1为78.36mg/L、5-Fu为45.61mg/L。两种药物联合应用表现了较明显的协同作用，其中在浓度40mg/L的5-Fu和50mg/L的Rg1联合应用最为明显。结论：5-氟尿嘧啶与人参皂苷Rg1均具有抑制人胰腺癌细胞PC-3体外增殖的作用。两药联用具有协同作用，并且能够促进癌细胞凋亡。关键词：人参皂苷Rg15-Fu人胰腺癌细胞PC-3协同作用细胞周期凋亡前言胰腺癌（pancreaticcancer）是消化系统较常见、恶性程度较高的肿瘤，进展迅速，手术切除率低，预后极差，近几年来发病率在国内外均有逐年上升趋势[1]。由于胰腺癌在临床上缺乏特异表现，在就诊时3/4的病人已属晚期，确诊病例手术可切除率仅为4％～27％，世界上每年有胰腺癌新发病例约20万人，占全部恶性肿瘤发病的2％，其死亡率与发病率十分接近，每年死亡人数约19.6万人，5年生存率＜5％。化疗是胰腺癌重要的辅助治疗手段，对于改善病人生存质量，延长生存期有一定作用。目前，5-Fu是胰腺癌化疗的一线药物，其具有抑制肿瘤细胞胸腺嘧啶核苷酸合成酶、破坏DNA稳定性等作用，其主要副作用为胃肠道反应和骨髓抑制，但总体有效率低于20％。探求高效低毒的化疗药物和化疗方案是各国医学科研工作者不懈努力的方向。[1-3]中医中药在肿瘤防治中具有一定作用，中药以其丰富的资源、独特的疗效和毒副作用少等特点，已引起世界各国科研工作者的关注。来源于天然中药的榄香烯、紫杉醇和喜树碱类等化合物目前已用于临床抗肿瘤治疗[4]。人参(PanaxginsengC.A.Meyer)是传统的名贵中药材，在中国、日本、朝鲜等国家很多中药复方是以其做为君药，在疾病的治疗和预防中发挥着巨大作用。人参的化学成分复杂，包括皂苷、糖类、蛋白质、多肤、氨基酸、有机酸、维生素、脂溶性成分等。人参的主要药用活性成分就是人参皂苷和人参多糖，其中对人参皂昔的药理作用研究较为广泛。早在1978年，韩国学者就使用红参提取物对DMBA诱导的小鼠肿瘤进行了抑制试验，结果表明，红参提取物能明显抑制DMBA诱导的肿瘤细胞的增殖，延长小鼠的存活时间[5]。近年来的研究表明，未经降解的人参皂苷Rb1,Rb3,Rg1和Rd就已经具有一定的抗肿瘤活性，可见其在肿瘤治疗和预防方面具有很高的药用价值。人参皂苷Rg1为人参的提取物，实验研究证明人参皂苷Rg1不仅对肿瘤细胞有直接杀伤作用，而且还可诱导某些肿瘤细胞向正常细胞分化和促进凋亡，并可调节肿瘤患者的免疫力。人参皂苷与5-氟尿嘧啶均具有良好的抗肿瘤活性，但人参皂苷与5-氟尿嘧啶联合应用抗胰腺癌肿瘤机制的研究还未见报道。本课题将人参皂苷Rg1与5-氟尿嘧啶联用,对比两者单用及联用对胰腺癌细胞PC-3增殖的影响，为寻求新的胰腺癌治疗方案提供实验依据。对于提高化疗药物疗效，又减少全身的毒副反应，降低医疗费用，提高患者生活质量，具有社会效益和经济效益。1.材料与方法：1.1材料1.1.1细胞株人胰腺癌细胞株PC-3华中科技大学附属同济医院肝胆胰研究所1.1.2药物与主要试剂5-FU(纯度99%)Across，Belgium人参皂苷Rg1中国药品生物制品检定所DMEM/HIGHGLUCOSE(1X)HyClone，USAPenicillin-StreptomycinHyclone，USA胎牛血清Hyclone，USA胰蛋白酶/EDTA消化液中国医学科学院生物工程研究所PBSSigma，USA噻唑蓝(MTT)Sigma，USA台盼蓝Sigma，USA二甲基亚砜北京索莱宝科技有限公司Annexin-V-FITC/PI凋亡检测试剂盒Invitrogen，USA1.1.3主要仪器电热鼓风干燥箱天津泰斯特仪器有限公司超低温冰箱U410NewBrunswickScientificCo.,Inc.USA酶标仪（BIO-RAD680）Bio-RadL