三种免疫细胞联合治疗结直肠癌的临床效应及机制分析-clinical effect and mechanism analysis of three kinds of immune cells in the treatment of colorectal cancer.docxVIP

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2018-07-30 发布于上海
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三种免疫细胞联合治疗结直肠癌的临床效应及机制分析-clinical effect and mechanism analysis of three kinds of immune cells in the treatment of colorectal cancer.docx

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三种免疫细胞联合治疗结直肠癌的临床效应及机制分析-clinical effect and mechanism analysis of three kinds of immune cells in the treatment of colorectal cancer

解放军医学院硕士学位论文解放军医学院硕士学位论文 PAGE PAGE 2 忆 T 细胞比例，评估免疫治疗后体内形成的 T 细胞免疫记忆状态；用磁珠从外周血分离的 PBMC 中分离 CD4+、CD8+T 细胞，分别提取 CD4+/CD8+T 细胞中 RNA 并进行逆转录，应用 TCR CDR3 多态性及克隆化可视化和定量化检测技术对逆转录产物进行巢式 PCR，对产物进行基因扫描，获得免疫治疗前后 TCR CDR3 基因扫描谱；同时对 PCR 产物进行电泳，获得 TCR CDR3 基因电泳谱，选取免疫治疗前后持续表达的 Vβ2 和治疗后出现的 Vβ11 单克隆条带进行切胶纯化；将纯化的 PCR 产物进行 TA 克隆及细菌转化，通过蓝白筛选活的克隆菌落培养后提取质粒，对含有目的片段的质粒进行基因测序,采用 Vector NTI version 11 和 HYPERLINK /IMGT_vquest/share/textes/imgtvquest.html IMGT/V-QUEST 对序列进行分析。结果：1）免疫治疗组 3 年和 5 年生存率较对照组均显著升高（87.07% VS 74.80%；75.63% VS 67.81%，P0.05）。2）免疫治疗组中治疗频次 ≥3 个周期患者 5 年生存率较3 个周期的患者显著升高（82.10% VS 69.90%，P0.05）。 3）免疫细胞治疗前（亦是手术前荷瘤状态）外周血 TCR CDR3 基因谱显示： 3 例结直肠癌患者均表达 CD8+TCR Vβ2、Vβ3、Vβ5、Vβ8 和 Vβ22 单克隆基因条带，表明初诊时结直肠癌患者体内预存特异性抗肿瘤克隆化 T 细胞。4）对比分析免疫细胞治疗前及治疗后的 CD8+TCR CDR3 基因谱显示：3 例结直肠癌患者治疗前后持续共表达单克隆 Vβ2，而 Vβ3、Vβ5、Vβ8 和 Vβ22 则呈现恢复多态性趋势，说明结直肠癌患者本身存在特异性的抗肿瘤克隆化 T 细胞，免疫细胞治疗后预存免疫状态得以保持。治疗后 3 例患者均出现了单克隆 Vβ11，即免疫细胞治疗诱导产生了新的克隆化 T 细胞。5.免疫治疗后结直肠癌患者外周血中 CD8+中央型记忆 T 细胞比例较治疗前显著升高，即抗肿瘤特异性 T 细胞比例显著升高。5）3 例结直肠癌患者外周血 TCRVβ2 克隆化 CDR3 区第 1-3 位共表达氨基酸序列为 CSA，而 Vβ11 共表达氨基酸序列为 CAS，D 区和 J 区存在部分共表达的氨基酸序列。结论：1）围手术期免疫细胞治疗可以显著提高结直肠癌术后 3 年和 5 年生存率。2）免疫细胞治疗在保持患者体内预存抗肿瘤免疫的同时，诱导产生了新的克隆化 CD8+T 细胞，同时形成免疫记忆，重建抗肿瘤特异性免疫。关键词：结直肠癌，免疫治疗，树突状细胞，T 淋巴细胞，T 细胞受体 Clinical Significance and Mechanism of Immunotherapy with Combined Three Kinds of Cells for Operable Colorectal Cancer Abstract BACKGROUND: Despite with better prognosis than other kind gastrointestinal tumors, quite a part of colorectal cancer patients still suffer recurrence or metastasis. Surgery, chemotherapy and radiotherapy can kill tumor cells , which also make damage to immune function. As emerging means of cancer treatment, immunotherapy has showed efficacy in the treatment of solid tumors. Despite clinic application of DCs, DC-AT and ATC alone, Immunotherapy with combined three kinds of cells for colorectal with various therapeutic approaches at different timing has never been reported. Being main effect cells of three kinds of cells immunotherap