基因克隆及功能分析课件.pptVIP

高级分子生物学技术;(一）分子生物学定义;（二）分子生物学的主要研究内容; 狭义上讲，基因工程是指基因与载体在体外的拼接，然后转入另一种生物体内，进行遗传并表达出新的性状。又称DNA重组技术。 广义上讲，基因工程是指重组DNA技术的产业化，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。 ;(四）、分子生物学的应用;课次;;基因克隆;Whole genome sequencing has now become routine;;科研机构及网络资源中心;国内生物信息中心举例;Nucleic acid sequence databases;;Protein sequence databases;代表性的基因组学数据库有： 人类基因组数据库GDB 中国水稻基因组数据库 /viewdb.jsp?uri=cn.csdb.ricegene NCBI基因组数据库Genome ;NCBI;;;;;;;;;;;;Rapid Amplification of cDNA Ends (RACE);;3 RACE-PCR;;5’-RACE;;;;;蛋白质序列比对;基因的功能分析;转基因小鼠和基因敲除小鼠是当前研究基因功能最常用的动物模型；植物模型为转基因拟南芥或水稻及其突变体库。目的载体的构建转基因操作转基因阳性系鉴定及基因功能研究;酶切连接的方法构建载体;ACTAAAGGGAACAAAAGCTGGAGCTCCACCGCGGTGGCGGCCGCTCTAGAACTAGTGGATCCCCCGGGCTGCAGGAATTCGAGACCCCCCCCCGCCAAGAAAGTCTGAAGAAAGCACCGATCAAAAGAGCTACCACAAATCAATCGCTCACCCTTCCGCTTCCAACACTAATCAAATCGTCGATTCCTTCCACCAGCAGCTCGAATCCCCATCAACAATGTCGCTGATCCGCCGCAGCAACGTGTTCGACCCCTTCTCCCTCGACTTCTTCGACCCTTTTGACGGCTTCCCCTTCGGCTCCGGCAGCAGCAACAGCGGCGGCAGCCTCGTCCCGCGCACCTCCTCCGACACGGCGGCCTTCGCGGGCGCGCGCATCGACTGGAAGGAGACGCCCGAGGCGCACGTGTTCAAGGCGGACGTCCCCGGGCTGAAGAAGGAGGAGGTGAAGGTGGAGGTGGAGGACGGCAACATCCTCCAGATCAGCGGCGAGCGGAACAAGGAGCAGGAGGAGAAGACCGACACCTGGCACAGGGTGGAGCGCAGCAGCGGCAAGTTCCTCCGCAGGTTCCGGCTCCCGGAGAACGCCAAGGCGGAGCAGGTGAAGGCGTCGATGGAGAACGGCGTGCTCACCGTCACCGTGCCCAAGGAGGAGGCCAAGAAGCCCGACGTCAAGTCCATCCAGATCTCCGGCTAGGCGTCTGCGTGCTCGCTGCGCGATGAGGTGGACTGCAGAGCAGAGGTGTGGAGTTTCGCCCCGGTGGTAGTGATGAAATTAAAAAAAACCAGAGTCCGGCTGTCCGTGCGTGCGCTGTGTGTCTAGTACTCTAGCGTTGTGTGCGAATAAATCTCGTCTGTGTTTCCAATCCAGCACTCAATAATGA;Gateway技术构建载体 ;其基本原理为：在Gateway系列的载体中，一般均包含两个???组位点序列，而在两者中间有一个大肠杆菌普通菌株的致死基因——ccdB基因，克隆时没有被切开的载体或者自身环化的载体在遗传转化后因带有该致死基因，该大肠杆菌菌株不能生长，包含目的基因的载体因其ccdB基因已被目的基因替换，菌株才能正常生长繁殖。 ;无需DNA连接酶做连接，只需要在5’端PCR引物上游设计上CACC四个碱基，TOPO酶即可将PCR产物进行定向克隆到pENTR载体中作为gateway技术的入门载体;混合包含目的基因的入门克隆和合适的目的载体及Gateway? LR Clonase?酶，产生表达克隆。;;Gateway技术产生的分子生物学基础;转基因流程;转基因流程;转基因程序;;;正向遗传学;图位克隆的基本原理;;图位克隆能实现，关键在于全基因组（Col-0生态型）测序计划的完成和各种分子标记的发现。;