无细胞蛋白表达系统简介.PDFVIP

无细胞蛋白表达系统简介 无细胞蛋白表达系统，含有蛋白合成所需各主要组分（氨基酸、酶、各种因子等），不受细胞核（核酸DNA/RNA)、线粒体、 细胞骨架等的干扰，能够在体外快速、大量表达蛋白。体外无细胞蛋白表达系统分为原核和真核两大类，原核系统以细 菌裂解物为基础，如大肠杆菌系统；真核系统以真核细胞裂解物为基础，包括麦胚系统、昆虫系统、兔网织红细胞系统 等。这一真正的“开放”系统，能够特异性表达目的蛋白，产生的蛋白可用于蛋白质功能检测、结构分析等下游实验。 该系统应用至今，已成功表达超过2 万种蛋白，其中包括13364 个人类的基因。部分数据列表如下： 拟南芥 蛋白激酶 500 小鼠 蛋白激酶 300 蛋白磷酸化酶 86 转录因子 900 转录因子 750 蛋白酶 180 蛋白酶 50 膜蛋白 180 蛋白激酶 300 自身抗原 240 蛋白磷酸化酶 80 疟原虫 1000 人类 转录因子 900 病毒 70 核受体 38 原核生物 300 蛋白酶 75 （Nature Methods 2008,5,1011-1017） 欲了解人类基因表达的更多详情，请登录Human Gene and Protein Database (HGPD) 八 无细胞蛋白表达系统与传统的细胞内表达系统相比，无需诱导培养，大大简化了操作步骤以及下游实验流程，能够用于 统 系 达 表 白 蛋 胞 细 无 高通量以及大量表达的实验；体外表达取消了生理限制，显著提高具有功能性、可溶性、全长蛋白的总体产量；由于能 够实现磷酸化修饰，并不受蛋白毒性影响，该系统十分适合激酶、膜蛋白等毒性蛋白的表达；并可通过修饰的tRNA ， 在特定位点插入非天然氨基酸标记。 无细胞蛋白表达系统特点 ■操作简便：只需按照说明书添加各种成分即可，像做PCR 一样简单 ■需时短：只需2-24 小时即可完成实验 ■表达量高：可实现规模表达，最大表达量可达50 mg/10 ml 反应体系 ■轻松表达困难蛋白：突破传统细胞内表达的极限，实现毒蛋白、膜蛋白、包涵体及不溶蛋白的表达 ■蛋白共表达：可以进行多个模板的同时表达 ■开放系统：能够添加蛋白酶抑制剂、稀有密码子，进行氨基酸标记等 无细胞蛋白表达系统与传统细胞表达系统特点比