乳和乳粉中氯霉素残留量的测定方法.docVIP

乳及乳粉中氯霉素残留量的测定方法 超高效液相色谱-串联质谱法 标准操作程序 1 安全提示 本试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，操作时须小心谨慎！如溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。 （μg/kg）μg/kg） 线性范围 （μg/L） 回收率（%） RSD（%） 氯霉素 0.1 0.2 3.3 仪器和设备 3.3.1 液相色谱-质谱联用仪。 3.3.2分析天平：感量0.1mg、0.01g。 3.3.3机械振荡器。 3.3.4 离心机。 3.3.5 涡旋混匀器。 3.3.6 固相萃取仪。 3.3.7 氮吹浓缩仪。 3.3.8 移液枪：~1000μL。μg/mL，用甲醇溶解定容，储存在4±4℃。使用时根据需要用乙腈-水溶液（1 + 4）逐级稀释。 3.4.3.3 标准使用溶液：根据需要用空白基质溶液配制，一般使用0.2 ng/mL、0.5 ng/mL。 3.4.4 材料 3.4.4.1 固相萃取柱：Oasis HLB，60 mg，3cc。 3.5 实验方法 3.5.1 试样制备和保存 取代表性样品约500 g，装入洁净的容器内，密闭并标明标记。于4 ℃冰箱中保存。 3.5.2 分析步骤 3.5.2.1 提取 3.5.2.1.1 乳粉 称取4 g试样（精确到0.01g），置于50 mL具塞试管中，加入20 mL乙酸乙酯，振荡提取20 min，过滤，残渣再用15 mL × 2的乙酸乙酯重复提取2次，合并提取液，40 ℃减压浓缩至干，待净化。 3.5.2.1.2 乳 称取4 g试样（精确到0.01g），置于50 mL具塞试管中，加入1g氯化钠、20 mL乙酸乙酯，振荡提取20 min，取乙酸乙酯层，过滤，再用15 mL × 2的乙酸乙酯重复提取2次，合并乙酸乙酯提取液，40 ℃减压浓缩至干，待净化。 3.5.2.2.1 脱脂净化（鲜乳样品可不进行该步净化） 向残渣（3.5.2.1）中依次加入1 mL甲醇、25 mL氯化钠溶液（4 %），溶解混匀，加入20 mL正己烷，振荡萃取5 min，弃去正己烷层，再用20 mL正己烷重复脱脂一次，弃去所有正己烷，加入20 mL 乙酸乙酯，振荡萃取5 min，吸取乙酸乙酯层，再用20 mL × 2的乙酸乙酯重复萃取两次，合并乙酸乙酯萃取液，40 ℃减压浓缩至干，用10.0 mL水溶解残渣，待进一步净化。 3.5.2.2.2 固相萃取净化 依次用 mL甲醇、5 mL水活化固相萃取柱，取 mL待净化液（3.5.2.2.1）上样，用5 mL水淋洗固相萃取小柱，氮气吹干10 min，用 mL乙酸乙酯洗脱，整个净化过程保持流速2 mL/min，收集洗脱液，于0 ℃水浴中氮气吹干，用1.0 mL水（）定容。 色谱柱：色谱柱(柱长5 cm，柱径2.1 mm，粒径1. μm)； Waters Masslynx v4.1； 电离模式：ESI negative； Capillary Voltage：3 kV； Extractor Voltage：5 V； Desolvation gas：氮气，500 L/Hr； Cone gas：氮气，50 L/Hr； Collision gas：氩气，0.2 mL / min； Source temp.：110 ℃； Desolvation temp.：350 ℃； 采集模式：Multiple Reaction Monitoring(MRM)； MRM条件如表4，其中m/z 321.00152.01为定量离子对。 表4 氯霉素的MRM条件 化合物 MRM transitions Dell time (sec) Cone voltage (V) Collision energy (eV) 氯霉素 321.00/152.01 0.2 30 20 321.00/257.10 0.2 12 321.00/194.00 0.2 10 3.5.2.2.3 定量测定 根据样品溶液中氯霉素残留的含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样品溶液中氯霉素的响应值均应在仪器测定的线性范围内。对标准工作溶液和样品溶液等体积分时段穿插进行测定。在上述液相色谱-质谱条件下，氯霉素的参考保留时间如表5所示。 表5 氯霉素的参考保留时间 目标物名称 保留时间/min 氯霉素 1.73 氯霉素选择性离子流图参见附录A中图A.1。 3.5.2.3.4 定性测定 按照超高效液相色谱-串联质谱测定条件测定基质标准工作溶液和样品溶液，如果样品中目标物质的保留时间与相近浓度基质标准溶液的保留时间偏差在± 2.5 %以内；且定性离子对的相对丰度与相近浓度基质标准溶液对应定性离子对的相对丰度进行比较，若偏差不超过表6规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。 表