复方中药粗提物的级和生物活筛选.pptVIP

复方中药粗提物的分级和生物活性筛选 综合化学实验（化学生物学） 授课教师 闫素君 马林 Tel:cesyansj@mail.sysu.edu.cn 一、实验目的 了解复方中药美白原理 掌握中药粗提物的提取方法 传统/现代 理解并掌握提取物的分级方法和操作 萃取，减压柱层析 熟悉酶标仪的原理及使用 掌握酪氨酸酶活性测试方法、数据处理方法及表达 二、实验原理 将具有美白效果的复方中药的粗提物按极性大小进行分级，建立一个分级库后，进行酪氨酸酶活性筛选（还可以进行黑色素合成、增殖以及其它靶蛋白的筛选），从而系统性地研究中药复方的分子药理学，阐明其作用机制。 1. 提取方法—溶剂法：醇/水（70%） 2. 分级方法—减压柱层析：避免乳化，提高效率 3. 活性筛选—以邻苯二酚为底物，通过测试反应速率变化（反应体系的OD值变化）确定酪氨酸酶活性，从而确定各分级提取物对酪氨酸酶抑制活性的IC50 三、实验仪器和试剂 烧杯、砂芯漏斗、抽滤瓶、圆底烧瓶、锥形瓶、塑料样品管、96孔酶标板、刮铲、滴管等 旋转蒸发仪、水泵、移液枪、紫外-可见分光光度计、酶标仪 中药复方：甘草50g，白芷20g，土茯苓20g，川芎20g，丹皮10g，丹参10g，当归10g，桃仁10g，红花10g 氯仿、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、二甲亚砜、水 多酚氧化酶粗酶、邻