抗体制药ppt课件第三章.pptVIP

（七）杂交瘤培养物（阳性克隆）的鉴定与检测 经培养而得到的杂交瘤细胞，只有一部分细胞可能产生针对特异抗原的目的抗体，因抗体产生细胞只占所有脾细胞的5%左右。 因此，在培养9~11天左右，杂交瘤细胞集落直径达1mm时，就应对其能否分泌抗体进行特异性鉴定，以便对抗体分泌阳性的杂交瘤细胞进行克隆化和扩张。 检测时，取上清液的一半体积用于抗体测定，其余再补加等量的HT完全培养基。 1、鉴定与检测方法的要求 应快速、灵敏、特异性（专一性）强、微量、简便并一次能检测大批标本。 2、常用的检测方法有 ①、抗原直接结合法：适用于检测能与可溶性和颗粒抗原特异结合的抗体。 ②利用第二抗体检测的方法：适用于检测能与可溶性和颗粒抗原特异结合的抗体。 有酶联免疫法，放射免疫法，免疫电镜技术，免疫荧光技术。 （1）抗原直接结合法 ①选取相应的纯一抗原，用125I进行标记，然后和杂交瘤细胞培养的上清液混合，在一定温度下反应一定时间（如4℃，1h等） ②再通过活性炭吸附、PEG 6000沉淀或凝胶层析的方法分离未结合的抗原，纯化抗体抗原免疫复合物。 ③最后通过测定其复合物的放射性强弱来进行定性和定量测定。 （2）利用第二抗体检测 第二抗体：能与抗原和抗体发生免疫反应后形成的复合物进行特异结合的抗体，又称抗抗体 应用第二抗体检测杂交瘤分泌的抗体时，需采用免疫标记技术。将第二抗体用125