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亲和反应及其在分离中的应用;Email: wangyj@zjut.edu.cn 手机浙江工业大学生物工程研究所;Know me better;亚胺培南;3.3.1 生物拆分法生产(S)-(+)-2,2-二甲基环丙甲酰胺;transcription RNA polymerase;13 member ring;下游过程的成本;生化分离一般流程;生物分离工程的发展趋势;A ligand that specifically binds to a unique protein is linked to a solid support. Specific proteins bind to the ligand while other proteins pass through. The protein can be eluted by salts or changes in pH.;亲合层析是利用各种生物亲合力（酶与底物，激素与受体，抗原与抗体）使蛋白质选择性的被固定相吸附。 上述作用对的一种物质，配基，被固定在固定相上，另一个物质，反配基（通常是蛋白质），在过柱过程中被捕集。 亲合层析专一性、选择性非常高。;Examples of biological interactions used in Affinity Chromatography;Process of AC;亲和层析介质;Equilibrating, and Loading affinity column ;Proteins sieve through matrix of affinity beads ;Proteins interact with affinity ligand with some binding loosely and others tightly ;Wash off proteins that do not bind ;Wash off proteins that bind loosely ;Elute proteins that bind tightly to ligand and collect purified protein of intere ;亲和层析基质;理想的亲和配基应该具有以下特征， 配基和目标蛋白必须能够形成可逆的复合物； 专一性必须适宜； 复合物结合常数（ 105-106 M）应当足够高以形成稳定的复合物，这样在层析过程中产生足够的保留； 通过环境简单的变化就能容易的使复合物解离，对蛋白质、配基不产生可逆的影响； 亲和配基应具有良好的化学性质，能容易地固定到基质上。;酶的抑制剂;抗体亲和层析;金属螯合亲和层析-IMAC;IMAC机理; 对于欲使用A.C.分离的特定蛋白质，往往有几种可供选择的配基。除了1个明显使用的单克隆抗体以外，可以寻找天然的生物特异性作用对，如酶-底物（结构类似物），酶-辅因子（结构类似物），酶-抑制剂。对于糖蛋白，可以使用固定化的凝集素。 仿生染料具有更多样性的特异性。 反配基固定到基质上，作用所需的结合常数Ka，对于大多数实际使用的，要超过或者等于105-106 M (对应的解离常数KD 1-10 μM)。 KD是Ka的倒数。 亲和作用强常常需要距离的、甚至变性条件来洗脱。结合常数Ka超过1010-1011M的往往不能使用，因为洗脱所需的条件可能与蛋白质变性条件一样。;间隔臂(Spacer);AF的吸附;AF洗脱;咪唑环是组氨酸结构的一部分;;;亲和膜分离技术;膜分离过程概述;膜分离过程的特性;膜分离的粒子范围;膜分离过程的分类;膜分离过程的分类;微滤与超滤;分离膜的特性要求;膜材料;浓差极化现象与膜污染 ;浓差极化与边界层;;膜分离的应用情况;亲和膜概念的提出;膜分离与亲和层析;A review about AM;AM Process;亲和膜的基本要求;AM的操作方式;一些亲和膜的特征与应用;亲和-错流过滤;亲和-错流过滤的特点;亲和作用基本理论;亲和-错流过滤模型;亲和膜材料;亲和膜活化;亲和膜活化方法;亲和膜活化方法(续);实例1-聚偏氟乙烯中空纤维亲和膜分离血浆γ-球蛋白;血浆蛋白的常规纯化方法;PVDF亲水性改性处理;Thanks for your attention!