人乳头瘤病毒荧光定量PCR法检测生物学自然科学专业资料ppt课件.ppt

人乳头瘤病毒(HPV);人乳头瘤病毒与疾病 低危型HPV主要引起子宫颈良性乳头瘤样变、肛门皮肤和外生殖器疣类病变； 高危型HPV主要引起宫颈癌、外阴癌、肛门癌等恶性肿瘤 其中HPV16和HPV18是引起宫颈癌的最常见的两种亚型，HPV16与宫颈鳞癌关系最为密切，HPV18易导致宫颈腺癌 妇产科门诊（皮肤科、泌尿外科门诊）;人乳头瘤病毒的传播途径 HPV主要通过直接或间接接触污染物品或性接触传播。 1 性传播途径； 2 密切接触； 3 间接接触：通过接触感染者的衣物、生活用品、用具等； 4 医源性感染：医务人员在治疗护理时防护不好，造成自身感染或通过医务人员传给患者； 5 母婴传播：婴儿通过孕妇产道的密切接触;人乳头瘤病毒的感染特征 HPV感染多为短暂性的，约有80％的女性在其一生中的某个阶段曾经感染。 通常HPV在感染后的6-12个月内可自行消失，只有少部分为持续感染。 高危型HPV持续感染是激发宫颈上皮恶性转化的最重要危险因素，它能使宫颈癌的发生风险提高250倍，是宫颈癌及癌前病变发生发展的必要条件。 一般从HPV最初感染到癌前病变，最终演变为宫颈浸润癌至少需要10--15年。; “几乎所有宫颈癌患者的病理样本中均能找到HPV病毒，从而印证了HPV是宫颈癌的主要原因，也使宫颈癌成为目前人类所有癌症病变中唯一个病因明确的癌症。” Jan M. Walboomers教授; 预防HPV感染就可以预防宫颈癌，没有HPV感染就可以不患宫颈癌。 中华医学会妇产科分会主任委员北京协和医院妇产科专家 郎景和教授;宫颈癌的症状;;人乳头瘤病毒的实验室检测 目前宫颈癌筛查的方法多采用宫颈细胞学检查及HPV病毒检测。 薄层液基细胞学检测技术（Thin-Cytologic Test， TCT） 二代杂交捕获技术(HC2) 实时荧光定量PCR技术 阴道镜活检一组织病理学; 通过采集阴道或宫颈分泌物，获得脱落细胞后浸入液基细胞处理试剂中进行处理，试剂中的裂解成分能对红细胞进行裂解，去除红细胞对检验结果造成的干扰；同时试剂中的固定成分能保存固定白细胞、脱落上皮细胞等有价值的细胞；并使包裹在黏液中的有效细胞充分分离出来，防止有价值细胞的丢失。将有效细胞制备成细胞悬液，最后通过过滤离心方法清除黏液对制片的干扰，制成脱落细胞薄片。可用HE染色、巴氏染色或其他免疫组织化学染色等方法使细胞着色，再通过人工观察分析来检查阴道或宫颈的细胞形态，诊断子宫颈癌及其癌的前期变化、人乳头瘤病毒和单纯疱疹病毒感染。同时还能发现部分癌前病变，微生物感染如霉菌、滴虫、病毒、衣原体等。;5 计算机 判读 15 min后;TaqMan荧光探针： PCR扩增时在加入一对 引物的同时加入一个特 异性的荧光探针，该探 针为一寡核苷酸，两端 分别标记一个报告荧光 基团和一个淬灭荧光基 团。探针完整时，报告 基团发射的荧光信号被 淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。;阴道镜活检一组织病理学视为“金指标” ，但其有创伤性不作为常规的筛查手段。 细胞涂片检查敏感性一般在55%～80%左右，但一旦发现异常细胞，特异性可达到90%以上。 HPV检测虽敏感性高，但特异性一般只在64%～95%之间，这是由于大多数HPV阳性的病人可自然转阴，并不导致宫颈癌的发生。;《宫颈癌筛查指南》---筛查策略;筛查间隔 每年一次细胞学筛查，连续2次正常可改至3年 连续2次HPV和细胞学正常可延至5-8年. 随访对象 细胞学≥低度鳞状上皮内病变(LSIL)、组织学≥CINⅠ 特殊职业人群、30岁以上高危HPV感染者至少每半年一次;《宫颈癌筛查指南》---筛查推荐流程;HPV检查前的注意事项 1.检查前48小时内不要做阴道冲洗，不要再阴道内用药物；检查前不要进行醋酸或碘液涂抹。 2.检查前48小时最好不要进行性生活，月经期间不宜进行HPV检查。;如何看待HPV检测结果 1.HPV检测结果阴性，表明没有感染HPV，结合细胞学检测结果为阴性，3—5年不会发生宫颈癌。 2.HPV检测结果为阳性，表明有HPV感染，若同时细胞学阴性，则无需临床治疗，但需要随访追踪，不可忽视。若HPV检测和细胞学同时为阳性，应进一步检查。;HPV检测的意义 HPV分型： 感染的HPV类型预测受检者HPV阳性的发病风险度，决定其筛查间隔，预测患病风险； 有效对HPV阳性病人进行很好的随访监控，即可避免对病人进行过度治疗，又可控制病人的病情发展： HPV基因分型检测结果对