一个生物体的基因组DNA用限制性内切酶部分酶切后将酶切片段插入.PPTVIP

人工构建的质粒－pBR322 Ampr 氨苄青霉素抗性基因 Tetr 四环素抗性基因 插入失活 宁波第二中学 生物组 胡海明 2009.4.9 * * * 选修3 现代生物科技专题 选修3 现代生物科技专题第一章　基因工程 实例 棉铃虫是棉花蕾铃期重要钻蛀性害虫，主要蛀食蕾、花、铃，也取食嫩叶。棉铃虫对棉花危害十分严重。 苏云金芽孢杆菌的DNA分子上存在Bt基因，此基因表达一种内毒素(杀虫晶体蛋白)，可使棉铃虫中毒死亡。 第一章 基因工程 基因工程又叫做DNA重组技术。 这种技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切” 和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的新的生物类型和生物产品。 基因工程的核心是构建重组DNA分子。 基因工程基本步骤?获取目的基因 载体DNA选择重组DNA分子 重组DNA分子导入受体细胞 重组DNA分子在受体细胞内表达 时间：20世纪70年代 理论基础：DNA是遗传物质 DNA双螺旋结构 遗传信息传递方式（中心法则） 第一节 工具酶的发现和基因工程的诞生 科学探索的脚步 1866年，孟德尔提出遗传因子的分离定律和自由组合定律。 1902年，萨顿提出遗传的染色体学说 1910年，摩尔根用果蝇伴性遗传实验证实遗传的染色体学说。 1928年，格里菲思活体细菌转化实验 1944年，艾弗里离体细菌转化实验 1952年，赫尔希和蔡斯的噬菌体侵染细菌实验， 确认DNA是遗传物质 1953年，沃森和克里克提出DNA双螺旋结构模型。 1957年，提出中心法则 1958年，证实了DNA半保留复制 1969年，破译全部遗传密码 染色体 蛋白质 染色质 知识回顾 时间：20世纪70年代 理论基础：DNA是遗传物质 DNA双螺旋结构 遗传信息传递方式（中心法则） 技术基础（即工具）： 第一节 工具酶的发现和基因工程的诞生 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 载体质粒 基因操作的工具 1、基因的剪刀（分子手术刀） ——限制性核酸内切酶 2、基因的针线（分子缝合针） ——DNA连接酶 ? 3、基因的运输工具（分子运输车） ——载体（常见：质粒）??? 工具酶 ①分布：主要在原核生物中。 ②作用特点:识别和切割DNA分子内一小段特殊核苷酸序列（回文序列） ③作用部位：磷酸与脱氧核糖之间的键 --磷酸二酯键(断开) 1、基因的剪刀——限制性核酸内切酶 A T G C A T G C DNA分子 氢键 磷酸二酯键 5′ 3′ 3′ 5′ 粘性末端 粘性末端 某种限制性核酸内切酶：GAATTC 带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫粘性末端。 什么叫粘性末端？ 被限制性核酸内切酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫粘性末端。 粘性末端 粘性末端 例：几种限制性核酸内切酶识别序列及切点如下，请写出它们的粘性末端 ①GAATTC ②AAGCTT ③GGATCC ④AGATCT ⑤GTTAAC 粘性末端：AATT 粘性末端：AGCT 粘性末端：GATC 粘性末端：GATC 平末端 C 下面是5种限制性核酸内切酶对DNA分子的识别序列和剪切位点图（箭头表示剪切点、切出的断面为粘性末端）。 酶1：—↓GATC— 酶2：—CATG↓— 酶3：—G↓GATCC— 酶4：—CCGC↓GG— 酶5：—↓CCAGG— 请指出下列哪组表达正确 （ ）A.限制酶2和4识别的序列都包含4个碱基对 B.限制酶3和5识别的序列都包含5个碱基对C.限制酶1和3剪出的黏性末端相同 D.限制酶1和2剪出的黏性末端相同 C ①分布：主要在原核生物中。 ②作用特点:识别和切割DNA分子内一小段特殊核苷酸序列（回文序列） ③作用部位：磷酸与脱氧核糖之间的键 --磷酸二酯键(断开) 1、基因的剪刀——限制性核酸内切酶 ④切口类型：粘性末端和平末端 ⑤⑴同种限制性核酸内切酶来切割DNA分子，会产生相同的粘性末端。 ⑵若用不同的限制性核酸内切酶来切割DNA分子，多数情况下会产生不同的粘性末端，但也有可有会产生相同的粘性末端。 基因的针线：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A