在大肠腺癌中的表达（73页）ppt课件.pptVIP

EphA2在大肠腺癌中的表达;第一部分;EphA2基因的介绍;EphA2与肿瘤的关系;154例大肠腺癌组织和相应正常大肠粘膜组织均来自郑州大学第一、二附属医院和河南省肿瘤医院2001年1月~2004年12月手术切除标本的存档蜡块 (其中66例为手术切除新鲜标本和蜡块和88例存档蜡块) ;临床病理资料;66例新鲜手术切除标本均为大肠腺癌： 分化程度:高分化腺癌30例，中分化腺癌23 例，低分化腺癌13例。 浸润深度:粘膜层10例，粘膜下层0例，肌层14例，浆膜层37例，外周组织5例。 转移：有淋巴结转移者16例，无淋巴结转移者50例；有血道转移者1例，无血道转移者65例；无种植性转移。 ; 88例存档蜡块全部为腺癌: 分化程度：高分化腺癌21例，中分化腺癌18例，低分化29例和未分化20例； 浸润深度：粘膜层62例，粘膜下层1例，肌层17例、浆膜层5例，外周组织3例； 转移：有淋巴结转移者14例，无淋巴结转移者74例；有血道转移者11例，无血道转移者77例；有种植性转移者10例，无种植性转移者78例 。;技 术 路 线;一. 免疫组化 步骤 （略） 对照组设计：以已知EphA2阳性食管鳞癌和正常食管粘膜腺体组织切片作为阳性对照，用正常兔IgG代替一抗作为阴性对照，用PBS代替一抗作为空白对照。 免疫组化结果判定及定量分析：EPhA2免疫组化阳性表达位于细胞胞浆，呈棕黄色。定量分析采用高清晰图像处理系统，随机取10个高倍视野进行图像分析，对免疫组化切片检测EphA2阳性细胞数，依据阳性细胞所占肿瘤细胞面积的百分比和染色强度判断结果。;二 .组织中总RNA的提取及RT-PCR 步骤 （略） RNA浓度的测定 （略） 对照设置 ：（1）阴性对照：以去离子水代替提取 的总RNA，结果阴性。 （2）内参对照：用β-actin作为内参引物，与EphA2和KAI1引物分别同管扩增，结果在紫外灯下出现一条330bp的荧光带 结果判定 阳性判断标准为：目的EphA2基因RT-PCR产物凝胶电泳后在紫外灯下分别出现一条586bp的荧光带。;取大肠腺癌和正常大肠粘膜组织0.5g;FCM对照组设计和诊断标准：;FCM计算标准：;统计学处理;结 果;EphA2mRNA及蛋白表达与大肠腺癌的关系：免疫组化结果;免疫组化检测结果： EphA2蛋白定位于癌细胞、粘膜上皮细胞及癌组织血管内皮胞浆内，呈棕黄色。 阴性对照均无阳性显示。; 正常粘膜 116(75.3) 6(3.9) 26（16.9） 6（3.9） 1.369±0.663 腺 癌 12（7.8）32（20.8）48（22.7） 62（40.3）4.789±0.542 ;正常粘膜组织中EphA2蛋白表达 SP法 ×200;二.EphA2蛋白表达在大肠腺癌癌细胞与癌组织中血管内皮细胞的比较 ;大肠腺癌组织中癌细胞和血管内皮细胞EphA2蛋白的表达 SP法 ×400;三、EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因素的关系 （A);临床病理 EphA2蛋白表达例数(%) 学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P;EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因素的关系(C) ;EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因素的关系(D) ;EphA2蛋白表达与大肠腺癌的关系 (E); EphA2在大肠腺癌中的表达 SP法×200 EphA2免疫染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞的胞浆,强度I级;EphA2在大肠腺癌中的表达 SP法×200;EphA2在大肠腺癌中的表达 SP法×200 EphA2免疫染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞的胞浆,强度III级;EphA2在大肠腺癌组织中的表达 SP法×200 EphA2蛋白阳性染色定位在肿瘤区域和血管内皮细胞;EphA2基因RT-PCR结果;EphA2基因RT-PCR结果： 经RT-PCR扩增，目的条带为586bp。与EphA2引物同管扩增的β-actin内参引物为 330bp的荧光条带。以去离子水代替提取的总RNA的阴性对照无任何荧光条带显示。 ;一.EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学因素的关系;临床病理 Eph2mRNA EphA2/β-actin 学因素 例数 + － P (X±S) P;EphA2mRNA