端粒和端粒酶专题发言ppt课件.pptVIP

端粒与端粒酶 ;一、端粒和端粒酶的发现;3、1972年，Watson发现了一个问题：他发现模板（template）和引物（primer）的存在，而且只能从5`到3`端方面合成。这样，在引物被去除之后，细胞每分裂一次，在新合成的DNA互补链的5`端必将留下一个小空缺（一段端粒）。（见图1）这就不能解释DNA从头（denovo）合成的问题。这样，细胞染色体长度会越来越短，稳定性越来越差，直至最终细胞衰亡（senscence）。因此，科学家们考虑是否存在着一种不同于DNA多聚酶的酶来完成这一工作。;;细胞将停止分裂而趋于老化; 4、1984年，C W Greider和 E H Blackburn发现将一段单链的末端寡聚核苷酸加至四膜虫的提取物中后，其端粒的长度延长了，这也就说明了切实有这样的一种酶存在，他们将它命名为“端粒酶”（telomerase）。 5、1989年 , Greider等成功地克隆了四膜虫端粒酶的RNA组分的基因：为159个核苷酸，其中包含5`-CAACCCCAA-3`的膜板序列，以碱基互补的方式在3`端从头合成重复片段（GGGGTT）n。同年,美国加州大学的分子生物学教授Morin（1989年）首次在人宫颈癌细胞株HeLa细胞中发现并鉴定端粒酶存在一种核糖核蛋白质。 ;6、1995年,美国Geron公司Feng和纽约长岛冷泉港实验室　　　　　　　Greider等克隆了人端粒酶RNA组分的基因，命名为hTR（human Telomerase RNA）基因，定位于3号染色体（3q23.3）。hTR基因有约450个碱基的转录本，其中包含5`-CUAACCCUAAC共11个碱基的模板互补序列。这个模板互补序列刚好每次与1.5个（TTAGGG）重复序列互补，然后通过模板的滑动，再进行下一次合成。这个研究进一步揭示了端粒酶的作用原理。;端粒酶作用的一种模型;二、端粒;3、作用： 维持染色体的稳定性 　 虽然端粒序列不含功能基因，但是如果没有这些类似染色体的“帽子”（cap）结构的端粒，染色体之间就会出现端-端融合（end-to-end fusion）、降解（degradation）、重排（rearrangement）和染色体丢失（chromosomeloss）等变化，这些变化威胁着染色体的正确复制和细胞的存在。 ;起细胞分裂计时器的作用 端粒核苷酸复制和基因DNA不同，每复制一次减少50~100bp，其复制要靠具有反转录酶性质的端粒酶来完成，正常体细胞缺乏此酶，故随细胞分裂而变短，细???随之衰老。 　　　 　　 ; 4、特点： 一个细胞里不同染色体的端粒都由相同的重复序列组成，但不同物种的染色体端粒的重复序列是各异的。 端粒的重复序列不是在染色体DNA复制时连续合成的，而是由端粒酶(telomerase)合成后添加到染色体的末端。 不同年龄的人的体细胞的寿命明显不同，其端粒的长度也不相同，它是随着年龄的增长而缩短。 随着细胞分裂时染色体的复制使端粒不可避免地逐渐缩短，如人体细胞的端粒长度每年缩短30～50bp．端粒的缩短最终出现染色体的不稳定和细胞进入衰老乃至死亡。 ; 　因为端粒长度的缩短而导致细胞分裂的停止的机制尚不清楚，目前有三种理论： 第一种认为不断缩短的端粒最终将会影响到邻近的基因。 第二种认为端粒DNA的完全丢失将会产生损伤的信号，这将 会激活P53基因(抑癌基因)。 3. 第三种认为不是损伤的信号，而是缩短了的端粒本身激活了P53。　;;三、端粒酶 ㈠ 端粒酶的结构 端粒酶在结构上为一核糖核蛋白复合体,由RNA 和结合的蛋白质组成,是RNA依赖的DNA 聚合酶。它是一种特殊的能合成端粒DNA的酶,通过明显的模板依赖方式每次添加一个核苷酸。 端粒酶实质上是一种特殊的逆转录酶 端粒酶RNA(hTR) 端粒酶逆转录酶（TERT） 端粒酶结合蛋白（TEP） ;端粒酶RNA(hTR); 端粒酶是在染色体末端不断合成端粒序列的酶，它可以维持端粒的长度，维持细胞增殖潜能。端粒酶以自身RNA为模板合成端粒酶重复序列，具有逆转录酶活性，它的活性不依赖于DNA聚合酶，对RNA酶、蛋白酶和高温均敏感。端粒酶活性表达能稳定端粒的长度，抑制细胞的衰老，在生殖细胞和干细胞中可检测到高水平的端粒酶活性。 ;㈡ 端粒酶的两个主要功能;末端补齐机制：; 2. 修复断裂的染色体末端，从而避免了外切酶对染色体DNA更多的切割，维护了基因组遗传的稳定性。断裂染色体末端即使没有完整的端粒重复序列存在，但如有富含G、T的DNA存在，它也能被端粒酶作为引物DNA并为之延伸端粒序列，从而修复染色体断裂末端。;（三