医学大全从母亲血浆中进行非创伤性胎儿血型检测课件.ppt

从母亲血浆中进行非创伤性胎儿血型检测;胎儿/新生儿溶血疾病;抗体特异性;新生儿溶血病: 诊断及后续;;;Rh-预防;12;;Anti-D 同种异体免疫的频率;为何要开展胎儿 D状态的非创伤性测定？;一些 RhD 细节;RH 单倍体重排;1% 几率流产 11 周前不会出现;导致PND的胎儿组织的其他来源;胎儿 RHD 基因分型里程碑;它从哪儿来？ 胎儿细胞编程性死亡? 胎盘! 没有固定的屏障 滋养层 (Guibert et al.,Hum.Repr., 2003;18 (8), 1733-36);母体血浆中胎儿DNA的快速清除;样本运输:白细胞降解;样本运输:目标稳定;样本的制备和储存;;特异性无风险胎儿和新生儿评估系统(SAFE);目的;;挑战: 侵入性检测 vs. NIPD;游离胎儿DNA浓缩（cff DNA）Galbiati et al. Hum Genet (2005) 117:243-248;游离态胎儿DNA的浓缩物波动 Zhong XY et al. Obstet Gynecol 2000;96:991-6;IVDD 98/79/EC 附件I: 基本要求 (3);IVDD 98/79/EC 附件I: 基本要求 (3);3.2. 核酸扩增技术(NAT)的其他要求;SAFE: RHD NIPD 标准化 工作流;ＤＮＡ提取方法: 原理;方法; ;Legler TJ, et al.: Prenat Diagn 2007;27:824-9;自动化方法, pool 3:  用于PCR的 DNA 量;RHD NIPD 技术平台评估(大规模);自动化 DNA-提取方法 SAFE-NoE 调查 2006;德国可行性研究：母体血浆进行的胎儿RhD基因分型;该项研究的４个目的;研究计划;临床研究清单;伦理方面;样本收集;方法;Chemagen 磁性分离 组件 1 ;;采用磁性颗粒对ｃｆｆ抽提的首次评估;RHD exons 5 (Dψ neg.) and 7 (one exon had to be positive) 2 Replicates/sample: 2/2 positive/negative ? D-positive/negative 1/2 replicates positive ? Repeat 1/4 positive ? D-negative 2-3/4 positive ? D-positive Positive/negative controls Genomic DNA-standard, calculation of quantitative data: imported standard curve (Zimmermann et al., Clin.Chem. 2005, 51 (9); 1598-1604) External control: ?-Globin If quantity of D-positive DNA was more than 20% of the quantity of ?-Globin positive DNA, maternal buffy coat was tested for the presence of RHD and RHD sequencing performed. *Applied Biosystems, Foster City, USA;主线;PCR结果 – 血清学;这个研究为何独特?;结果;;胎儿DNA产量 (RHD exon 7)all D-pos samples;总结;结论;SAFE: RHD NIPD 标准化 工作流;对于NIPD 的RhD/SRY 血浆敏感性标准 (幻灯片由 Evelyn Tait, University of Aberdeen提供);RhD/SRY 血浆敏感性 NIPD标准;质量保证方案;内对照的可能性;哪一种内对照合适？;哪一种液态对照/验证物质可以被采用？;SAFE: RHD NIPD 标准化 工作流;结论 ;血型以外的NIPD应用Li et al. Ann N.Y Acad.Sci 2006 1092:285-292;SAFE- 进展;退行性紊乱: DNA短碎片的富集（胎儿）Hromadnikova et al. DNA and cell biology 2006;25:635-640;重亚硫酸盐疗法以及 甲基化作用 特异性 PCR/RFLPChim SSC et al. PNAS 2005;102:14753-14758;总结;致谢;Thank you for your attention!