芫荽人工种子制作研究.pptVIP

芫荽人工种子的制作研究 制作：346 研究目的人工种子，是细胞工程中最年轻的一项新兴技术。利用体细胞胚发生的特征，把它包埋在胶囊中，可以形成具有种子的性能并直接在田间播种。 优点1、通过组织培养的方法可以获得数量很多的胚状体而且繁殖速度快，结构完整； 　　2、可根据不同植物对生长的要求配置不同成分的“种皮”； 　　3、在大量繁殖苗木和用于人工造林方面，人工种子比采用试管苗的繁殖方法更能降低成本，而且方便机械化播种，可节省劳动力； 　　4、体细胞胚是由无性繁殖体系产生的，因而可以固定杂种； 　　5、有时可以在人工种子中加入某些农药、菌肥、有益微生物、激素等； 　　6、胚状体发育的途径可以作为高等植物基因工程和遗传工程的桥梁。 　　7、解决了有些作物品种繁殖能力差、结子困难或发芽率低等问题。 研究背景 最初是由英国科学家于1978年提出的。 1978年Murashige提出人工种子概念。 1984年Kitto首次制作出了胡萝卜的种子，但存活率很低。 1986年Redenbaugh等成功地利用藻酸钠包埋单个体细胞胚，生产人工种子 。 在国内，金翼毅等进行芹菜和苜蓿的人工种子的研究。李修庆建立了胡萝卜人工种子的基本制作流程，桂耀林等研究了换脸体细胞的胚胎发生并制出了人工种子。 培养技术 通过组织培养技术，可把植物组织的细胞培养成在形态及生理上与天然种子胚相似的胚状体，也叫作体细胞胚。这种体细胞胚有于叶、根、茎分生组织的结构。科学家把体细胞胚包埋在胶囊内形成球状结构，使其具备种子机能。所以，人工种子是一种人工制造的代替天然种子的颗粒体，可以直接播种于田间。 培养工艺流程 实验结果及分析—激素对芫荽愈伤组织诱导的影响 本实验设计了四种诱导培养基均能诱导出芫荽的愈伤组织。 2,4-D 1.0mg/L NAA 1.0mg/L 2,4-D 1.0mg/L KT 0.5mg/L NAA 2.0mg/L KT 0.5mg/L 1)2,4-D的诱导效果不及NAA 2)生长素类与细胞分裂素配合使用比单独施加生长素的诱导效果要好。 实验结果及分析—培养基对芫荽胚状体形成的影响 2,4-D去掉是必要的（表二），浓度为1.0mg/L时完全抑制成熟体细胞胚的形成 有机添加物对芫荽体细胞胚的发育也有显著影响，添加一定的酪朊水解物对体细胞的发育极为明显的促进作用，过多抑制 碳水化合物对芫荽体细胞胚的形成和发育也有一定的影响，3%蔗糖含量最适与芫荽成熟体细胞胚的形成，过高抑制 实验结果及分析—包埋芫荽胚状体 在固体培养基上生产的正常成熟胚状体，可挑出直接进行人工种子的制作； 悬浮培养基中形成的成熟的胚状体则先用18目的不锈钢网过滤，除去大的愈伤组织块，用长度为2mm的成熟的胚状体进行包埋。 包埋剂： 3%海藻酸钠，2%CaCl2﹒H2O固化，二者均用1/2MS配制，胚状体与包埋剂融合，然后吸管吸取胚状体并逐一滴入固化液中，待固定成形后用无菌水冲洗，便可得到。 ★包埋球在固化液（2%CaCl2﹒H2O)中停留约20~30分钟。 实验结果及分析—人工种子的播种，萌发及幼苗的移栽 播种在1/2MS固体培养基上的人工种子萌发状态最好，大86%以上，在湿润滤纸上萌发率为62%，在湿润蛭石中只有2%。一方面是被污染另一方面是通气不良。 * * b a c 番木瓜体细胞胚人工种子（Castillo等，1998）； b. 马铃薯微芽人工种子（Patel等，2000）； c. 人参体细胞种子（Choi和Jeong，2002）。 外植体（芫荽幼苗的茎）脱分化、去分化，用诱导培养基诱导出芫荽的愈伤组织 将颗粒性胚状愈伤组织转移到分化分培养基或不含2,4-D的MS培养基上发育（经球形胚，心形胚，鱼雷型胚）为成熟的胚状体 胚状体的包埋 人工种子的播种、萌发、幼苗的移栽 外植体 愈伤组织 人工种子 体细胞胚 *