生物制药细胞工程单克隆抗体课件.ppt

Emil von Behring, 1901, antitoxins;发明单克隆抗体技术 Nobel Prize in 1984;抗体发展的三个阶段;传统抗血清;细胞工程杂交瘤技术 ;;;;;抗体药物销售趋势图; 全球有超过200家上市或未上市公司正在研发用于临床诊断和治疗的单克隆抗体 正在进行临床试验的抗体公司（38家）：;;;抗体 是对其抗原有极强专一性 的 魔弹 或 巡弋飞弹;SDA批准进入临床的体内诊断用抗体;SDA批准进入临床的治疗用单抗;抗体治疗疾病的机制;单抗研发的演变历程;抗体攻击病毒;凝集细菌;;抗体生成技术;;整体水平抗体生成技术;1 多克隆抗血清;来源: 组织和细胞，其成分比较复杂。 1.组织和细胞成分混合抗原制备 2.蛋白质抗原制备 3.核酸抗原制备 4.类脂多糖抗原制备 5.免疫球蛋白片段制备 6.纯化抗原的鉴定; 组织和细胞成分混合抗原制备程序; 绵羊红细胞的制备流程图; 细菌细胞抗原的制备流程图;杂交瘤技术过程;多克隆抗体;多克隆抗体（polyclonal antibody） 指由不同B细胞克隆产生的针对抗原物质中多种抗原决定簇的多种抗体混合物。 如:免疫血清（含多种特异性抗体）。 实际意义： （1）预防、治疗感染性疾病， 如：破伤风抗毒素血清 ? 抗破伤风， 胎盘球蛋白? 抗病毒感染等 副作用：?超敏反应 （2）临床诊断，如：肥达氏反应 -- 伤寒、副伤寒 缺点：特异性差。;;; 传统抗血清的交叉反应;; ;;1;m; 抗体;;抗体的结构;1 小分子抗体;(1) 小分子抗体;小分子抗体;;;II Fv antibody molecule;;;(2) 抗体融合蛋白;G-CSF;(3) 鼠单抗人源化;鼠单抗人源化;;;Pr 鼠VH 人 CH Pr 鼠VL 人 CL;;定义：指利用基因工程技术，将人抗体可变区（V）中互补决定簇（CDR）序列改换成鼠源单抗CDR序列。重构成既具有鼠源性单抗的特异性又保持抗体亲和力的人源化抗体。RAb亦叫“重构型抗体”，因其主要涉及CDR的“移植”，又可称为“CDR移植抗体 意义：多种特异的鼠源单抗有可能应用于临床治疗;;抗体库技术;抗体库技术产生的三项技术基础;;;噬菌体抗体图示;定义：将体外克隆的抗体基因片段插入噬菌体载体，转染工程细菌进行表达，然后用抗原筛选即可获得特异的??克隆噬菌体抗体。利用这一技术可以得到完全人源性的抗体，在HIV等病毒感染和肿瘤的诊断与治疗方面有其独特的优越性;用PCR扩增人抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因 克隆到噬菌体载体并以融合蛋白的形式表达在其外壳表面 用抗原抗体反应筛选出表达所需要抗体的克隆并扩增。 使抗体基因以分泌的方式表达，获得可溶性的抗体片段。 抗体库： 组合抗体文库：在建库过程中如果将VH和VL随机组合 人天然抗体库：抗体mRNA来源于未经免疫的正常人;噬菌体抗体库;从外周血或脾、淋巴结等组织中分离B淋巴细胞，提取mRNA并逆转录为cDNA； 应用抗体轻链和重链引物，根据建库的需要通过PCR技术扩增不同的Ig基因片段； 构建噬菌体载体。噬菌体抗体库载体有λ噬菌体、丝状噬菌体和噬菌粒三种，其中后二者是目前构建表面表达的噬菌体抗体库(surface display antibody library)常用载体； 表达载体转化细菌，构建全套抗体库。通过多轮的抗原亲合吸附-洗脱-扩增，最终筛选出抗原特异的抗体克隆。 ;模拟天然全套抗体库 抗体文库可以达到或超过1011库容,能包含B细胞全部克隆 建库的外源基因来自人体多克隆细胞的总mRNA 通用引物具有人的种属普遍性 抗体的VH和VL基因的随机重组也增加了抗体的多样性 避开了人工免疫和杂交瘤技术 抗体库的大容量 抗体库极高的筛选效率 可获得高亲和力的人源化抗体 VH和VL基因的随机重组模拟了体内抗体亲和力成熟的过程 所用的抗体基因又来自人体;抗体库的构建;抗体库的富集筛选;;治疗性抗体的研发阶段;主要研究进展;靶抗原的发现;TRAIL: TNF-related apoptosis-induced ligand TRAILR: DR4、DR5、DcR1、DcR2、OPG;Protein extraction and digestion;20a5-6 Heavy Chain;主要研究进展;治疗性抗体产生抗－抗体的比例;抗体人源化的主要技术;嵌合抗体、CDR移植抗体;SDR人源化方法;鼠抗体（红）和人源化抗体（绿