微生物的利用-大肠杆菌的培养与分离课件.pptxVIP

微生物的利用;大肠杆菌的培养和分离;实验目的;实验原理;培养基;;2、营养成分 ② 氮源 为微生物提供氮元素的物质，可分为有机氮源和无机氮源 。有机氮源包括牛肉膏，蛋白胨等， 无机氮源包括 N2、NH3、NH4+、NO3-等，只有固氮微生物才能利用 N2。 ;2、营养成分 ③ 生长因子 通常指那些微生物生长所必需而且需要量很小，自身不能 合成或合成量不足机体生长需要的有机化合物。 一般可分为维生素、氨基酸、嘌呤与嘧啶这三类。 ;2、营养成分 ④ 无机盐 无机盐是微生物生长、代谢必不可少的一类营养物质。 无机盐生理功能主要是：作为酶活性中心的组成部分；构成微生 物细胞的各种组分；调节并维持细胞的渗透压平衡、调节pH和控制细胞的氧化还原位；作为某些微生物生长的能源物质。 常见种类：磷酸盐、硫酸盐、氯化物，以及含有钠、钾、钙、镁 、铁等金属元素的化合物。 ;2、营养成分 注意： ①这几类营养成分不一定都需要一一单独添加。 ②不是所有培养基都必须同时含有碳源、氮源、水、无机盐 、生长因子。 ;二、培养基的类型;a.液体培养基：不加凝固剂，配置成液体状态。 应用：在用液体培养基培养微生物时，通过振荡或搅拌可以 增加培养基的通气量，同时使营养物质分布均匀。 液体培养基常用于大规模工业生产，以及在实验室进行微生物的基础理论和应用方面的研究。 ;b.固体培养基：加入较多凝固剂，配置成固体状态,主要用于 获取单菌落，并对微生物的分离、鉴定、活菌计数及菌种保藏等。 常用的凝固剂有琼脂、明胶、和硅胶。 绝大多数微生物而言，琼脂是最理想的凝固剂，由藻类( 海产石花菜)中提取的一种复杂多糖；明胶是由胶原蛋白制备得到的产物，是最早用来作为凝固剂的物质；硅胶是由无机的硅酸钠等制成的胶体。 ;;;;①基础培养基： 含有一般微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基，如牛肉膏蛋白胨培养基。 应用：基础培养基可以用来作为一些特殊培养基的基础成分。 ②加富培养基：在基础培养基中加入某些特殊营养物质制成 的一类营养丰富的培养基，用来培养营养要求比较苛刻的异养型微生物。 这些特殊营养物质包括血液、血清、酵母浸膏、动植物组织 液等。 应用：加富培养基可以用来培养营养要求比较苛刻的异养型微生物，以及从环境中富集和分离某种微生物。;;;b.在培养基中加入某种化学物质 , 这种化学物质没有营养作用 , 对所需分离的微生物无害 , 但可以抑制或杀死其他微生物 。 如 ：在培养基中加入青霉素、 四环素或链霉素 , 可以抑制细菌 和放线菌生长 , 而将酵母菌和霉菌分离出来。 现代基因克隆技 术中也常用选择培养基 , 筛选含有重组质粒的基因工程菌株。 在培养基中加入高浓度的NaCl可得到金黄色葡萄球菌。 注意：有的培养基可以同时是选择+鉴别培养基 当要分离金黄色葡萄球菌时 , 在培养基中加入 7.5%NaCl 、甘露糖醇和酸碱指示剂 。 金黄色葡萄球菌可耐高浓度 NaCl, 且能利用甘露糖醇产酸。因此 ，能在上述培养基生长，而且菌落周围培养基颜色发生变化，则该菌落有可能是金黄色葡萄球菌 , 再通过进一步鉴定加以确定。 ;;第一题;;大肠杆菌是革兰氏阴性兼性厌氧的肠道杆菌，原核生物，以二分裂方式繁殖。;细菌是单细胞的原核生物。细菌细胞的结构有细胞壁、细胞膜、细胞质等。细菌无成型的细胞核，细胞壁由肽聚糖组成。由于细菌细胞壁结构不同，细菌可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。革兰氏阳性菌细胞壁厚，无荚膜，多产生外毒素；革兰氏阴性菌细胞壁薄，有荚膜，多产生内毒素。革兰氏阳性菌对青霉素更为敏感。 大肠杆菌是革兰氏阴性、异养兼性厌氧型肠道杆菌。在肠道中一般对人无害，但任何大肠杆菌进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。大肠杆菌在基因工程技术中被广泛的应用，它的质粒是最常用的运载体，它也是基因工程中常用的受体细胞。 ;;划线分离法;无菌技术;2、实现无菌的常用方法 消毒 灭菌 ① 消毒： 采用相对较为温和物理或化学方法，杀死物体表面或内部部分的微 生物（不包括芽孢和孢子）。 常见的消毒方法：煮沸消毒法、紫外线消毒法、巴氏消毒法以及利 用化学药品消毒等;常用消毒方法;② 灭菌： 指用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物（包括芽孢和 孢子）。 常见的灭菌方法：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌等;;② 无菌实验器材： 凡是实验中使用的器材，能灭菌处理的必须灭菌。 如玻璃器皿 （包括注射器、吸管、滴管、三角瓶、试管等）、培养基、无菌衣 、口罩等，无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理，例如无菌室内的凳、试管架、天平等，这些虽然无法灭菌，但是可以消毒，可用化学药品熏蒸、喷洒或擦拭。;③ 无菌操作方法： a.对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒; b.将用于微