卫生学试验基本技术.pptVIP

第一章 基本技术;第一节 实 验 室 设 置;细胞工程实验室的基本要求;基 本 实 验 室;辅 助 实 验 室;基本设备配置;天平 ，冰箱 ，酸度计 ，纯水器 ;活性成分过滤灭菌;;保持干燥,控制光照和温度;培养容器与用具;倒置显微镜; 第二节 细胞工程的基本技术;一、无菌操作技术;一、无菌操作技术;洗 涤 剂;? 常用的铬酸洗涤液配方 ; 玻璃器皿洗涤 新的玻璃器皿 新的玻璃器皿上附有游离的碱性物质，其洗涤方法是用1%的HCl溶液浸泡一昼夜，再用合成洗涤剂洗刷，然后用清水反复冲洗，最后用蒸馏水冲洗1～2次，干燥后即可使用。 已使用过的试管、烧杯、三角瓶 先将器皿中的残渣除去，用清水洗净，再用合成洗涤剂洗刷，用清水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1～2次。 吸管、滴管等内径狭小的玻璃制品 需先放入铬酸洗涤液中浸泡两小时以上，取出后经流水冲洗半小时左右，再用蒸馏水冲洗1～2次，然后烘干或晾干。载玻片和盖玻片容易破碎，洗涤时不宜用力擦洗，其洗涤方法是先用清水冲洗，然后放入铬酸洗涤液中浸泡几小时或用稀铬酸洗涤液煮沸半小时，取出后用清水冲洗干净，将其储藏在95%的酒精中。;塑料用品洗涤 一般用合成洗涤剂洗涤，因其附着力较 强，因此冲洗时必须反复多次，最后用 蒸馏水冲洗。 金属用品洗涤 金属用品一般不宜用各种洗涤液洗涤， 需要清洗时，一般用酒精擦洗，然后火 焰干燥。 ;培养基：湿热灭菌，即高压高温蒸汽灭菌. 玻璃器皿：湿热灭菌或干热灭菌，即在烘箱中加热 至150℃40分钟，或120℃2小时. 金属器皿：干热灭菌. 接种室：接种室常采用定期熏蒸，熏蒸剂常用甲 醛加高锰酸钾，一般每100ml甲醛加5g高锰酸钾 ;活性成分过滤灭菌;? 培养基体积与灭菌时间的关系;二、细胞培养技术;二、细胞培养技术;动物细胞培养;原代培养 (primary culture);细胞株(cell strain);Hela细胞（左）、CHO细胞（右）的培养;三、细胞融合技术;三、细胞融合技术;细胞融合;;细胞融合;四、单克隆抗体技术;单克隆抗体技术;;细胞拆合与显微操作技术;;Knockout Mice ;基因敲除;基因敲除示??图（1）;基因敲除示意图（2）;基因敲除原理; Knockout Mice ;第三节 培养基及其配制 ;培养基基本成分;无 机 盐 类;有 机 成 分;植 物 激 素;水;其它附加成分;常用培养基配方;培 养 基 配 制;植物激素配制;植物组织培养 植物组织培养是在无菌和人为控制外因（营养成分、光、温度、湿度）条件下，研究、培养植物组织器官，甚至进而从中分化、发育出整体植株的技术。 进行植物组织培养，一般要经历以下五个阶段： 1.预备阶段(外质体)； 2.诱导去分化阶段； 3.继代增殖阶段； 4.生根成芽阶段； 5.移栽成活阶段。;一般方法;经过锻炼的小苗，可以和一般植物一样进行大规模栽培;第四节 外植体接种培养 ;植物材料的培养与外植体选取 外植体灭菌 接种培养及培养条件的控制;外植体的来源 ;供体植株的管理 ;外植体取材 ;预备阶段;外 植 体 灭 菌;;接种培养及培养条件的控制;光照包括：时间、强度和光质； 光照时间影响植株再生状态； 光照强度因植物类型不同而异； 光质研究报道较少;在大多数情况下，适温有利于细胞分裂，即可以提高细胞分裂速率，而适当提高温度则有利于细胞伸长，在一定范围内降低培养温度则使细胞分裂和生长速度均减缓，而且使细胞的质量增加。 ;;通常使用的pH值范围是5.5～6.5。pH在4.0以下或7.0以上培养物就不能正常生长。 由于外植体的吸收，引起培养过程中的pH变化 高压灭菌引起pH 变化