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猪2型圆环病毒病的诊断 猪2型圆环病毒病的诊断 猪2型圆环病毒病（PCVD）： 包括猪断奶后多系统衰竭综合症（PMWS）、猪皮炎和肾病综合症（PDNS）、育肥猪的慢性呼吸道病综合征（PRDC） 、母猪流产、先天性震颤 (CT)等疾病。 该病以生长发育不良，贫血，进行性消瘦，腹泻，咳嗽，呼吸困难，全身淋巴结高度肿大为特征。 该病已经成为严重危害世界养猪业的一种新的重要传染病，并引起国际上的高度重视。 猪2型圆环病毒病的诊断 猪2型圆环病毒病 猪2型圆环病毒病 PCR诊断方法 根据猪2型圆环病毒基因的保守区设计一对特异性的扩增PCV2核酸的 263bp片段的引物，用于检测疑似病料。 P1：5′- TAGGTTAGGGCTGTGGCCTT -3′ P2：5′- CCGCACCTTCGGATATACTG -3′ 用提取的组织DNA做模板进行PCR扩增。 反应体系（10μL)：引物P1、P2各1μL，模板2μL，灭菌水1μL，goTaq酶5μL。 反应参数：95℃预变性35 min后，94℃变性30s，55℃复性30s，72℃延伸30s，共进行30个循环，最后72℃延伸10min。 PCR产物的鉴定与回收纯化 猪2型圆环病毒病 临床诊断结果 剖检变化 琼脂糖电泳结果 测序结果 对PCV2检测结果为阳性的病料组织的PCR产物进行序列测定，序列测定结果表明，该PCR产物全长263bp，并将测序结果与Genebank中PCV2序列进行比较分析，证明所得病毒序列为PCV2序列。 TAGGTTAGGGCTGTGGCCTTGGAGTGGGCTCCAGTGCTGTTATTCTAGATGATAACTTTGTAACAAAGGCCACAGCCCTCACCTATGACCCCTATGTAAACTACTCCCCGCCATACCATAACCCAGCCCTTCTCCTACCACTCCCGCTACTTTACCCCCAAACCTGTCCCAGATTCCACTATTGATTACTTCCAACCAAACAACAAAAGAAATCAGCTGTGGCTGAGACTACAAACTACTGGAAATGTAGACCGAAGGTGCGG 讨论 结论 1.从辽宁地区某猪场发病猪群中采集病料，通过临床症状、病理剖检变化的观察初步确诊为猪2型圆环病毒感染。 2.根据猪2型圆环病毒基因的保守区设计一对特异性的引物，用于检测疑似病料。PCR检测结果表明：从送检的病料组织中扩增出263bp的PCV2目的片断，与预期片断大小相符。 3.将PCR产物与pMD18-T载体连接, 将阳性重组质粒送TaKaRa大连生物工程公司进行核酸序列测定，结果表明该病毒为猪2型圆环病毒。 Thank You! * * L/O/G/O 猪2型圆环病毒病的诊断 目的与意义 材料与方法 结果与分析 讨论与结论 4 1 2 3 内 容 目的 意义 能够根据临床症状及剖检变化初步诊断 方法简单、快速，为猪2型圆环病毒病的快速诊断提供了一种新的方法 掌握2型圆环病毒病的临床症状和病理剖检变化 掌握猪2型圆环病毒病的PCR诊断方法 目的与意义 材料 显微镜、程控热循环仪、高速台式冷冻离心机、恒温摇床、高压电泳仪、微量恒温器、 酸度计、凝胶成像系统 试剂 GoTaq聚合酶， DL-2000 Marker，琼脂糖，DNA回收试剂盒，设计引物，普通肉汤和普通营养琼脂培养基等。 病料 主要仪器 疑似病猪的肺脏、脾脏、淋巴结组织 临床症状及剖检变化 细菌学检查 PCR诊断 普通剖检方法，观察病理变化 实验室细菌培养 设计引物，PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳鉴定 方法 肌肉萎缩、淋巴结肿大、橡皮肺、心包炎、肾肿大、胃溃疡 分离培养，无任何细菌生长 扩增结果与预期相符 结果 剖检病理变化 细菌学检查 PCR诊断 图1 病猪进行性消瘦、被毛粗乱、贫血 图2 腹股沟淋巴结肿大 图3 肺脏呈斑驳状，质地似橡皮 M：DL-2000 Marker 1：病料的检测结果 2：未接病料的阴性对照 M 1 2 PCR是一种快速、简便、特异和易于操作的方法，所以在病毒诊断方面得到了广泛的应用，在PCV-2诊断方面也取得了巨大的进步。本次实验是在临床初步诊断的基础上，采集病猪肺脏等组织，提取DNA之后采用 PCR方法进行了实验室诊断，最终确诊为猪2型圆环病毒感染。 发病猪群应采取加强饲养管理，定期消毒，严格防疫。减少饲养密度，严格执行全进全出制，减少应激因素的发生。没有发生该病的养殖场应坚持自繁